熊小丽; 鄢素琪; 周俪姗; 秦欢; 张领领; 陈鹏; 乐鑫; 姚聪; 丁艳

doi:10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.07.007

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• 消化营养性疾病 •

大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株法尼醇X受体的调节作用

中华实用儿科临床杂志, 2018,33(7) : 509-512. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.07.007

摘要

目的

研究大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株法尼醇X受体(FXR)通路的调节作用。

方法

模型组采用孕二烯二酮(Guggulsterones)对L02细胞株的FXR基因干预，根据大黄素剂量分为高剂量、中剂量、低剂量组(50.0 μmol/L、25.0 μmol/L、12.5 μmol/L)，另设对照组。采用实时荧光定量PCR与Western blot检测FXR及下游小异源二聚体伴侣受体(SHP)、尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移酶2B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP) mRNA及蛋白表达。

结果

1．模型组FXR mRNA及蛋白相对表达量(0.240±0.021、0.385±0.119)较对照组(1.000±0.088、1.000±0.223)显著降低，差异均有统计学意义(t＝14.62、4.21，均P<0.01)；与模型组比较，大黄素高、中、低剂量组FXR mRNA相对表达量(0.755±0.083、0.817±0.097、0.547±0.080)显著升高，差异均有统计学意义(t＝10.42、10.03、6.39，均P<0.01)；中剂量组FXR蛋白相对表达量(0.865±0.203)显著升高，差异有统计学意义(t＝3.53，P<0.01)；高、中剂量组FXR mRNA相对表达量(0.755±0.083、0.817±0.097)均高于低剂量组(0.547±0.080)，差异均有统计学意义(t＝3.11、3.70，均P<0.01)。2.模型组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白相对表达量(0.148±0.025、0.205±0.039、0.184±0.020，0.458±0.130、0.255±0.170、0.303±0.100)较对照组(1.000±0.099、1.000±0.104、1.000±0.125，1.000±0.129、1.000±0.157、1.000±0.162)显著降低，差异均有统计学意义(t＝14.50、12.44、11.19、5.13、5.57、6.33，均P<0.01)。高、中、低剂量组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA相对表达量(0.610±0.058、0.514±0.041、0.707±0.062，0.755±0.108、0.800±0.086、0.727±0.076，0.470±0.070、0.582±0.050、0.500±0.108)较模型组(0.148±0.025、0.205±0.039、0.184±0.020)显著升高，差异均有统计学意义(t＝12.75、9.38、13.94、9.46、10.90、11.96、7.53、10.31、5.00，均P<0.01)；高、中剂量组SHP、UGT2B4、BSEP蛋白相对表达量(0.658±0.091、0.624±0.113、0.607±0.097，0.868±0.194、0.883±0.099、0.913±0.131)较模型组(0.458±0.130、0.255±0.170、0.303±0.100)显著升高，差异均有统计学意义(t＝2.18、3.13、3.78、3.05、5.53、6.41，均P<0.01)，低剂量组SHP、BSEP蛋白相对表达量(0.645±0.135、0.572±0.076)不同程度升高，差异均有统计学意义(t＝1.73，P<0.05，t＝3.72，P<0.01)。大黄素高、中剂量组BSEP蛋白相对表达量(0.607±0.097、0.913±0.131)均高于低剂量组(0.572±0.076)，差异均有统计学意义(t＝1.99、3.90，均P<0.01)；高、低剂量组SHP、UGT2B4 mRNA相对表达量(0.610±0.058、0.470±0.070，0.514±0.041、0.582±0.050)均低于中剂量组(0.800±0.086)，差异均有统计学意义(t＝3.75、6.47、3.83、3.42，均P<0.01)；高、低剂量组UGT2B4、BSEP蛋白表达量(0.624±0.113、0.644±0.097，0.607±0.097、0.572±0.076)均低于中剂量组(0.883±0.099、0.913±0.131)，差异均有统计学意义(t＝4.27、2.98、6.30、3.90，均P<0.01)。

结论

Guggulsterones能抑制L02细胞株FXR及下游SHP、UGT2B4、BSEP基因表达，大黄素可通过对FXR基因表达上调，促进SHP、UGT2B4、BSEP基因表达上调，抑制胆汁淤积通路来保护肝细胞，但有剂量差异。

引用本文: 熊小丽, 鄢素琪, 周俪姗, 等. 大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株法尼醇X受体的调节作用 [J] . 中华实用儿科临床杂志, 2018, 33(7) : 509-512. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.07.007.

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婴儿胆汁淤积发病率为活产婴儿的1/2 500^[1]。熊去氧胆酸(ursodesoxycholic acid，UDCA)和糖皮质激素为治疗主药，但近三分之一患儿对UDCA无反应^[2]。近年发现法尼醇X受体(farnesoid X receptor，FXR)在胆汁淤积代谢中起关键作用^[3,4]。作者前期研究表明，动物水平FXR和小分子异源二聚体伴侣(small heterodimer parter，SHP)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶2B4(UDP－glucuronosyltransferase 2B4，UGT2B4)、胆盐输出泵(bile salt export pump，BSEP)参与了於胆型肝炎的发生^[5]。大黄素可缓解α-异硫氰酸萘酯(alpha－naphthy-lisothiocyanate ANIT)诱导动物肝内胆汁淤积^[5,6]。本研究从细胞水平探讨大黄素对FXR相关通路调节，为治疗儿童胆汁淤积药物的研发提供理论依据。

1　材料与方法

1.1　细胞

人胚胎肝细胞L02细胞株购自中国科学院细胞库。

1.2　药物

大黄素(美国Sigma公司，生产批号：043K3505-1V)；孕二烯二酮(Guggulsterones)(美国Santa Cruz公司，批号：F6058)。

1.3　试剂

HyClone南美胎牛血清与改良型1640培养液购于美国Hyclone公司；核蛋白与浆蛋白抽提试剂盒及二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶制备试剂盒购于武汉阿斯本生物技术有限公司；FXR抗体、小分子异源二聚体伴侣抗体、胆盐输出泵抗体(美国Santa Cruz公司)；UGT2B4(美国Fitzgerald公司)。SYBR Premix Ex Taq试剂盒(日本TaKaRa公司)。

1.4　仪器

电泳仪(型号：DYY-6C)及转移电泳仪(型号：DYCZ-400D)均为北京六一仪器厂；荧光定量PCR仪(型号：StepOne™ Real-Time PCR System，Life techno-logies公司)。

1.5　分组及处理

采用FXR抑制剂Guggulsterones抑制L02细胞中FXR表达^[6]。大黄素剂量选择：通过CCK8法筛选确定对细胞抑制率为20%时大黄素浓度为50 μmol/L，参照文献^[7]，分为高、中、低剂量组(50.0 μmol/L、25.0 μmol/L、12.5 μmol/L)。将LO2细胞予100 g/L海克隆(HyClone)南美胎牛血清(FBS)改良型RPMI-1640培养基培养12 h后做以下处理：(1)对照组：更换相同培养基继续培养48 h收集细胞；(2)模型组：换上含50 μmol/L的Guggulsterones和100 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基继续培养24 h，换上含50 μmol/L Guggulsterones、10 g/L二甲基亚砜(DMSO)和100 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h收集细胞；(3)大黄素高剂量组：换上含50.0 μmol/L Guggulsterones和100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h，换上含50.0 μmol/L大黄素的100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h收集细胞；(4)大黄素中剂量组：换上含50.0 μmol/L Guggulsterones和100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h，换上含25.0 μmol/L大黄素100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h收集细胞；(5)大黄素低剂量组：换上含50.0 μmol/L Guggulsterones和100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h，换上含12.5 μmol/L大黄素100.0 g/L FBS改良型RPMI-1640培养基培养24 h收集细胞。

1.6　Western blot检测蛋白表达

收集细胞样本提取组织及细胞核蛋白(检测FXR)和总蛋白(检测SHP、UGT2B4、BSEP)，BCA法检测蛋白浓度行变性预处理。经100 g/L SDS-PAGE分离胶电泳、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜转膜、50 g/L脱脂奶粉封闭、免疫反应抗体孵育一抗(稀释比例见表1)及二抗、化学发光检测和凝胶图像分析等步骤，由AlphaEaseFC软件处理分析比较待测蛋白与内参吸光度值。

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表1

一抗详细信息列表

Table 1

List of primary antibodies detailed information

表1

一抗详细信息列表

Table 1

List of primary antibodies detailed information

抗体名称	稀释比
抗磷酸甘油醛脱氢酶抗体	1 ：10 000
抗组织蛋白H3抗体	1 ：2 000
抗法尼醇X受体抗体	1 ：500
抗小分子异源二聚体伴侣抗体	1 ：500
抗胆盐输出泵抗体	1 ：500
抗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶2B4抗体	1 ：1 000

1.7　实时荧光定量PCR检测mRNA表达

收集细胞样本按Trizol(日本TaKaRa公司)说明书提取组织及细胞总RNA，取2 μg总RNA反转录，将各cDNA样本定量，检测目的、内参基因(引物信息见表2)。在Applied BiosystemsStepOne Real-Time PCR System(Life technologies公司)机器上进行变性、退火、扩增反应。反应条件：预变性(95 ℃，1 min)，循环(40次；95 ℃，15 s→58 ℃，20 s→72 ℃，20 s)末段延伸(72 ℃，5 min)熔解曲线(72 ℃→95 ℃，每20 s升温1 ℃)采用2^－ΔΔCt数值进行数据分析。

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表2

引物序列列表

Table 2

The primer sequence list

表2

引物序列列表

Table 2

The primer sequence list

基因(人)	上游引物(5′→3′)	下游引物(5′→3′)
β-actin	5′-GTCCACCGCAAATGCTTCTA-3′	5′-TGCTGTCACCTTCACCGTTC-3′
FXR	5′-AAGAGATGGGAATGTTGGCTG-3′	5′-CTCCCTGCATGACTTTGTTGTC-3′
SHP	5′-GAAAGGGACCATCCTCTTCAAC-3′	5′-TCTCCAATGATAGGGCGAAAG-3′
BSEP	5′-CAACTGCTGGACCGACAACC-3′	5′-CATCCACTGCTCCCAACAAAC-3′
UGT2B4	5′-GGTCGATGGTCAGTAACACGTC-3′	5′-TTGTACAGCCGAGTATTGAGTCCT-3′

注：β-actin：β肌动蛋白；FXR：法尼醇X受体；SHP：小异源二聚体伴侣受体；BSEP：胆盐输出泵；UGT2B4：尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移酶2B4　FXR：farnesoid X receptor；SHP：small heterodimer parter；BSEP：bile salt export pump；UGT2B4：UDP－glucuronosyltransferase 2B4

1.8　统计学处理

采用SPSS 21.0统计软件，计量资料采用±s表示，多组间采用单因素方差分析，组间比较采用LSD法，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株FXR mRNA与蛋白表达影响

模型组FXR mRNA及蛋白表达较对照组显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，大黄素各剂量组FXR mRNA表达显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)，中剂量组FXR蛋白表达显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。高、中剂量组FXR mRNA表达水平相似，均高于低剂量组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。结果见表3。

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表3

大黄素对L02细胞株FXR mRNA与蛋白表达影响(±s)

Table 3

Effects of emodin on expression of FXR mRNA and protein in L02 cell lines(±s)

表3

大黄素对L02细胞株FXR mRNA与蛋白表达影响(±s)

Table 3

Effects of emodin on expression of FXR mRNA and protein in L02 cell lines(±s)

组别	FXR mRNA	FXR蛋白
对照组	1.000±0.088	1.000±0.223
模型组	0.240±0.021^a	0.385±0.119^a
大黄素高剂量组	0.755±0.083^bc	0.629±0.126^b
大黄素中剂量组	0.817±0.097^b	0.865±0.203^b
大黄素低剂量组	0.547±0.080^bd	0.611±0.151^ce
F值	40.993	5.996
P值	<0.001	<0.010

注：FXR：法尼醇X受体；与对照组比较，^aP<0.01；与模型组比较，^bP<0.01，^eP<0.05；与大黄素中剂量组比较，^cP<0.05，^dP<0.01。数据来自于3次独立实验　FXR：farnesoid X receptor；compared with the control group，^aP<0.01；compared with the model group，^bP<0.01，^eP<0.05；compared with the middle－dose emodin group，^cP<0.05，^dP<0.01.The data comes from three separate experiments

2.2　大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株SHP、UGTSB4、BSEP mRNA及蛋白表达影响

模型组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达较对照组均显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较，大黄素各组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA与高、中剂量组蛋白表达均显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)，低剂量组SHP、BSEP蛋白有升高，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。高、中剂量组BSEP mRNA表达量均明显高于低剂量组，差异均有统计学意义(均P<0.01)；高、低剂量组SHP、UGT2B4 mRNA表达量均明显低于中剂量组，差异有统计学意义(均P<0.01)；高、低剂量组UGT2B4和BSEP蛋白表达量均明显低于中剂量组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。结果见表4、表5。

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表4

大黄素对L02细胞株SHP、UGTSB4、BSEP mRNA表达影响(±s)

Table 4

Effects of emodin on expressions of SHP，UGTSB4，BSEP mRNA in L02 cell lines(±s)

表4

大黄素对L02细胞株SHP、UGTSB4、BSEP mRNA表达影响(±s)

Table 4

Effects of emodin on expressions of SHP，UGTSB4，BSEP mRNA in L02 cell lines(±s)

组别	SHP	UGT2B4	BSEP
对照组	1.000±0.099	1.000±0.104	1.000±0.125
模型组	0.148±0.025^a	0.205±0.039^a	0.184±0.020^a
大黄素高剂量组	0.610±0.058^bc	0.514±0.041^bd	0.707±0.062^b
大黄素中剂量组	0.755±0.108^b	0.800±0.086^b	0.727±0.076^b
大黄素低剂量组	0.470±0.070^bd	0.582±0.050^bd	0.500±0.108^bd
F值	50.019	56.633	37.204
P值	<0.001	<0.001	<0.001

注：FXR：法尼醇X受体；SHP：小异源二聚体伴侣受体；UGT2B4：尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移酶2B4；BSEP：胆盐输出泵；与对照组比较，^aP<0.01；与模型组比较，^bP<0.01；与大黄素中剂量组比较，^cP<0.05，^dP<0.01。数据来自于3次独立实验　FXR：farnesoid X receptor；SHP：small heterodimer parter；UGT2B4：UDP－glucuronosyltransferase 2B4；BSEP：bile salt export pump；Compared with the control group，^aP<0.01；compared with the model group，^bP<0.01；compared with the middle－dose emodin group，^cP<0.05，^dP<0.01.The data comes from three separate experiments

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表5

大黄素对L02细胞株SHP、UGTSB4、BSEP蛋白表达影响(±s)

Table 5

Effects of emodin on expressions of SHP，UGTSB4，BSEP protein in L02 cell lines(±s)

表5

大黄素对L02细胞株SHP、UGTSB4、BSEP蛋白表达影响(±s)

Table 5

Effects of emodin on expressions of SHP，UGTSB4，BSEP protein in L02 cell lines(±s)

组别	SHP	UGT2B4	BSEP
对照组	1.000±0.129	1.000±0.157	1.000±0.162
模型组	0.458±0.130^a	0.255±0.170^a	0.303±0.100^a
大黄素高剂量组	0.658±0.091^b	0.624±0.113^b	0.607±0.097^b
大黄素中剂量组	0.868±0.194^b	0.883±0.099^b	0.913±0.131^b
大黄素低剂量组	0.645±0.135^cd	0.644±0.097^d	0.572±0.076^be
F值	6.856	14.396	17.230
P值	<0.010	<0.001	<0.001

注：FXR：法尼醇X受体；SHP：小异源二聚体伴侣受体；UGT2B4：尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移酶2B4；BSEP：胆盐输出泵；与对照组比较，^aP<0.01；与模型组比较，^bP<0.01，^cP<0.05；与大黄素中剂量组比较，^dP<0.01，^eP<0.05。数据来自于3次独立实验　FXR：farnesoid X receptor；SHP：small heterodimer parter；UGT2B4：UDP－glucuronosyltransferase 2B4；BSEP：bile salt export pump；Compared with the control group，^aP<0.01，^bP<0.01；compared with the model group，^cP<0.05；compared with the middle－dose emodin group，^dP<0.01，^eP<0.05.The data comes from three separate experiments

3　讨论

Guggulsterones为为目前公认FXR抑制剂^[8]。采用Guggulsterones干预L02细胞。本研究旨在细胞水平探讨大黄素对FXR及其下游与胆汁酸合成、解毒、转运有关SHP、UGT2B4、BSEP分子表达情况。

本研究结果表明，对照组L02细胞株存在FXR及SHP、UGT2B4、BSEP mRNA和蛋白表达。模型组FXR及SHP、UGT2B4、BSEP mRNA和蛋白表达较对照组降低，模型组有FXR表达，证实Guggulsterones对FXR部分抑制效果，成功建立细胞株FXR抑制模型组。

与模型组比较，大黄素各组FXR及下游SHP、UGT2B4、BSEP mRNA与高、中剂量组SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达均升高，低剂量组SHP、BSEP蛋白表达量升高。大黄素组间比较，高、中剂量组FXR、BSEP mRNA表达量均明显高于低剂量组；高、低剂量组SHP、UGT2B4 mRNA表达量均明显低于中剂量组；高、低剂量组UGT2B4和BSEP蛋白表达量明显低于中剂量组。从mRNA和蛋白水平，中剂量组上调FXR及下游SHP、UGT2B4、BSEP 3个分子的表达最强，可能与SHP、UGT2B4、BSEP启动子相同调节因素是核受体FXR相关^[9,10,11]。

大黄素各组FXR及SHP mRNA都较模型组明显扩增，但仅中剂量组对FXR和SHP的蛋白表达有上调作用，而高低剂量组没有显示出这样的作用，这种大黄素不同剂量组所显示出来的差异提示大黄素各组在L02细胞FXR及SHP基因表达调控水平上，对于转录、转录后及翻译、翻译后调控环节尚存在未知调控方式，需要后续探究。

从高、低剂量组FXR蛋白表达无增加，但UGT2B4及BSEP蛋白表达量增加，表明高、低剂量组中，可能有独立于FXR之外的因素调控UGT2B4及BSEP表达。研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferstor activated receptor γ，PPARγ)可以激活UGT2B4基因与蛋白表达，但抑制BSEP基因与蛋白表达^[12]，表明PPARγ不是引起BSEP升高因素，具体原因需后续研究。

大黄素能提高L02细胞株FXR及下游SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达，但存在剂量差异。大黄素通过促进FXR表达来调节与胆汁酸合成、解毒、转运相关基因SHP、UGT2B4、BSEP表达，介导抑制胆汁淤积通路，保护肝细胞。

参考文献

[1]

DinizG, Tosun YildirimH, CalkavurS, et al.Can neonatal hepatitis be more fatal than biliary atresia？[J]. Fetal Pediatr Pathol, 2015, 34(3): 162-168.DOI: 10.3109/15513815.2014.999393.

[2]

MousaHS, LleoA, InvernizziP, et al.Advances in pharmacotherapy for primary biliary cirrhosis[J]. Expert Opin Pharmacother, 2015, 16(5): 633-643.DOI: 10.1517/14656566.2015.998650.

[3]

FiorucciS, CiprianiS, MencarelliA, et al.Farnesoid X receptor agonist for the treatment of liver and metabolic disorders: focus on 6-ethyl-CDCA[J]. Mini Rev Med Chem, 2011, 11(9): 753-762.

[4]

FiorucciS, DistruttiE, RicciP, et al.Targeting FXR in cholestasis: hype or hope[J]. Expert Opin Ther Targets, 2014, 18(12): 1159-1449.DOI: 10.1517/14728222.2014.956087.

[5]

DingY, XiongXL, ZhaoL, et al.Role of farnesoid X receptor in rats with acute cholestatic hepatitis[J]. Chin J Hepatol, 2016, 24(6): 441-445.DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2016.06.009.

[6]

BrobstDE, DingX, CreechKL, et al.Guggulsterone activates multiple nuclear receptors and induces CYP3A gene expression through the pregnane X receptor[J]. J Pharmacol Exp Ther, 2004, 310(2): 528-535.

[7]

LiCL, MaJ, ZhengL, et al.Determination of emodin in L-02 cells and cell culture media with liquid chromatography-mass spectrometry: application to a cellular toxicokinetic study[J]. J Pharm Biomed Anal, 2012, 71: 71-78.DOI: 10.1016/j.jpba.2012.07.031.

[8]

AhmedR, WangYH, AliZ, et al.HPLC method for chemical fingerprinting of guggul (commiphora wightii)--Quantification of E- and Z-Guggulsterones and detection of possible adulterants[J]. Planta Med, 2016, 82(4): 356-361.DOI: 10.1055/s-0035-1558211.

[9]

PanX, LeeYK, JeongH. Farnesoid X receptor agonist represses cytochrome P450 2D6 expression by upregulating small heterodimer partner[J]. Drug Metab Dispos, 2015, 43(7): 1002-1007.DOI: 10.1124/dmd.115.064758.

[10]

BarrettKG, FangH, CukovicD, et al.Upregulation of UGT2B4 expression by 3′-Phosphoadenosine-5′-Phosphosulfate synthase knockdown: implications for coordinated control of bile acid conjugation[J]. Drug Metab Dispos, 2015, 43(7): 1061-1070.DOI: 10.1124/dmd.114.061440.

[11]

Aguilar-OlivosNE, Carrillo-CordovaDA, Sanchez-ValleV, et al.The nuclear receptor FXR, but not LXR, up-regulates bile acid transporter expression in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Ann Hepatol, 2015, 14(4): 487-493.

[12]

BarbierO, Duran-SandovalD, Pineda-TorraI, et al.Peroxisome proliferator-activated receptor alpha induces hepatic expression of the human bile acid glucuronidating UDP-glucuronosyltransferase 2B4 enzyme[J]. J Biol Chem, 2003, 278(35): 32852-32860.DOI: 10.1074/jbc.M305361200.

贡献者信息

熊小丽

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

鄢素琪

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

周俪姗

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

秦欢

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

张领领

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

陈鹏

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

乐鑫

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

姚聪

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院中西医结合科

丁艳

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院感染免疫科

通信作者

丁艳

430016　武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院感染免疫科

Email：dingyanmx@163.com

关键词

大黄素; 人胚胎肝细胞L02; 法尼醇X受体;

基金项目

国家自然科学基金青年基金（81403434）

武汉市应用基础计划项目（201506010101）

历史

出版日期：2018-04-05

收稿日期：2017-10-19

本文编辑

单卫华

Infectious Disease

The regulation effect of emodin on human embryonic hepatocyte L02 cell strain Farnesoid X receptor

Xiaoli Xiong, Suqi Yan, Lishan Zhou, Huan Qin, Lingling Zhang, Peng Chen, Xin Yue, Cong Yao, Yan Ding

Published 2018-04-05

Cite as Chin J Appl Clin Pediatr, 2018, 33(7): 509-512. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.07.007

Abstract

Objective

To investigate the regulation effect of emodin on human embryonic liver L02 cells strain farnesoid X receptor(FXR) pathways.

Methods

By using Guggulsterones, FXR genes were intervened with in L02 cells as model group, in three different concentrations of emodin (50.0 μmol/L, 25.0 μmol/L, 12.5 μmol/L) of emodin in the model group cells, FXR, small heterodimer parter(SHP), UDP-glucuronosyltransferase 2B4(UGT2B4), bile salt export pump(BSEP) mRNA and protein expressions were detected by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot test.

Results

(1)The relative expressions of FXR mRNA and protein in the model group (0.240±0.021, 0.385±0.119) decreased significantly than those of control group (1.000±0.088, 1.000±0.223), the differences were statistically significant (t=14.62, 4.21, all P<0.01). Compared with the model group, the relative expressions of FXR mRNA in the high, the middle and the low-dose emodin groups (0.755±0.083, 0.817±0.097, 0.547±0.080) were significantly higher (t=10.42, 10.03, 6.39, all P<0.01). The relative expressions of FXR protein in the medium-dose group (0.865±0.203) increased significantly (t=3.53, P<0.01). The relative expressions of FXR mRNA in the high and the medium-dose groups (0.755±0.083, 0.817±0.097) were higher than those in the low-dose group (0.547±0.080), the differences were statistically significant (t=3.11, 3.70, all P<0.01). (2)The relative expressions of SHP, UGT2B4, BSEP mRNA and protein in the model group (0.148±0.025, 0.205±0.039, 0.184±0.020; 0.458±0.130, 0.255±0.170, 0.303±0.100) were significantly lower than those in the control group (1.000±0.099, 1.000±0.104, 1.000±0.125; 1.000±0.129, 1.000±0.157, 1.000±0.162), the differences were statistically significant (t=14.50, 12.44, 11.19, 5.13, 5.57, 6.33, all P<0.01). The relative expressions of SHP, UGT2B4 and BSEP mRNA in the high, the middle and the low-dose groups (0.610±0.058, 0.514±0.041, 0.707±0.062; 0.755±0.108, 0.800±0.086, 0.727±0.076; 0.470±0.070, 0.582±0.050, 0.500±0.108) were significantly lower than those in the model group (0.148±0.025, 0.205±0.039, 0.184±0.020), the differences were statistically significant (t=12.75, 9.38, 13.94, 9.46, 10.90, 11.96, 7.53, 10.31, 5.00, all P<0.01). The relative expressions of SHP, UGT2B4 and BSEP mRNA in the high and the middle-dose emodin group (0.658±0.091, 0.624±0.113, 0.607±0.097; 0.868±0.194, 0.883±0.099, 0.913±0.131) were significantly higher than those in the low-dose group (0.458±0.130, 0.255±0.170, 0.303±0.100), the differences were statistically significant (t=2.18, 3.13, 3.78, 3.05, 5.53, 6.41, all P<0.01). The relative expression of SHP and BSEP protein in the low-dose group (0.645±0.135, 0.572±0.076) increased, the differences were statistically significant (t=1.73, P<0.05, t=3.72, P<0.01). The relative expression of BSEP protein in the high and the medium-dose groups (0.607±0.097, 0.913±0.131) was significantly higher than those in the low-dose group (0.572±0.076), the differences were statistically significant (t=1.99, 3.90, all P<0.01). The relative expressions of SHP and UGT2B4 mRNA in the high and the low-dose group (0.610±0.058, 0.470±0.070; 0.514±0.041, 0.582±0.050) were significantly lower than those in the medium-dose group (0.800±0.086), the differences were statistically significant (t=3.75, 6.47, 3.83, 3.42, all P<0.01). The expression levels of UGT2B4 and BSEP in the high and the low-dose groups(0.624±0.113, 0.644±0.097; 0.607±0.097, 0.572±0.076) were significantly lower than those in the medium-dose group(0.883±0.099, 0.913±0.131), the differences were statistically significant (t=4.27, 2.98, 6.30, 3.90, all P<0.01).

Conclusions

Guggulsterones can inhibit FXR and downstream genes SHP, UGT2B4, BSEP expressions in L02, and emodin can enhance FXR gene expression, promote SHP, UGT2B4, BSEP gene expression, inhibit cholestasis pathway, protection of liver cell, which shows a dosage discreapancy.

Key words:

Youth Fund of Emodin; Human embryonic liver cells L02; Farnesoid X receptor

Contributor Information

Xiaoli Xiong