观察脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone，DHEA)对体外人卵巢细胞——KGN细胞株凋亡的影响。
用不同剂量的DHEA(0.01 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L)处理体外培养的KGN细胞，以不加DHEA为阴性对照组，然后分别用CCK-8法和流式细胞术检测KGN细胞的活性和凋亡情况；并通过实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测雄激素受体(androgen receptor，AR)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，BCL-2)和BCL-2相关X蛋白(BCL-2 associated X protein, BAX)基因mRNA的表达水平；通过蛋白免疫印迹(Western blotting)检测AR、BCL-2、BAX、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)及磷酸化ERK(P-ERK)的表达水平。
与阴性对照组相比，经DHEA处理的KGN细胞的活力显著下降(P=0.000)，而且随着DHEA剂量的增加，KGN细胞的凋亡率也随之提高，其中10 mmol/L DHEA干预组的凋亡率与阴性对照组相比，差异具有统计学意义(P=0.019)；用不同浓度DHEA处理KGN细胞后，细胞中BCL-2蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低，其中10 mmol/L DHEA干预组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P=0.007)；与阴性对照组相比，0.1 mmol/L和10 mmol/L DHEA干预组细胞中BCL-2 mRNA的表达水平也显著降低(P=0.007，P=0.012)；而细胞中AR和BAX的表达水平无显著变化(P>0.05)；此外，虽然DHEA干预组KGN细胞中ERK蛋白的表达水平与阴性对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)，但P-ERK蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低，其中10 mmol/L DHEA干预组细胞中P-ERK蛋白的表达水平显著降低(P=0.005)。
DHEA能抑制KGN细胞的生长而促进其凋亡，并伴随着细胞中BCL-2蛋白和P-ERK蛋白表达水平的下降。
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卵泡的生长，与周围的颗粒细胞有着密切关系。有研究表明[1]，雄激素可刺激肝脏胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors，IGFs)的产生以及改善颗粒细胞的健康，而过高的雄激素将抑制卵泡的选择性生长，导致卵泡的闭锁，最终出现排卵障碍[2]，但是雄激素对卵泡发育影响的机制尚不清楚。一些临床研究表明，脱氢表雄酮(DHEA)作为雄激素生物合成过程中的一种中间产物，其对卵巢低反应患者的卵巢储备功能有一定的改善作用[3,4]。临床研究获得的人颗粒细胞，主要是通过体外受精(IVF)取卵时获得，而此时获得的颗粒细胞已向黄素化颗粒细胞转化，在培养过程中不传代，这样很难获得和维持基本培养体系。KGN细胞株能模拟出正常人颗粒细胞激素合成、凋亡调节等大部分生理活性，被认为是研究人颗粒细胞甾体激素的分泌、细胞的生长及凋亡十分有用的模型[5]。DHEA是人体内源性前甾体激素，是合成睾酮、雌激素等的前体物质，被称为"激素之母"，可通过肾上腺皮质、性腺及大脑等合成、分泌。DHEA在体内的浓度，于25~30岁时达到峰值，其后随着年龄的增加逐渐下降[6,7]。50%的多囊卵巢综合征(PCOS)患者是由于DHEA及硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)的轻度升高所致[8]，DHEA的升高可能导致卵泡发育障碍，闭锁的卵泡中颗粒细胞凋亡，被卵泡膜细胞及成纤维细胞代替[9]。DHEA对卵巢颗粒细胞的生物活性调控机制发挥重要的作用，故本研究通过DHEA干预KGN细胞株，观察DHEA对KGN细胞株凋亡的影响。
