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患者男，25岁。因左侧精索静脉曲张、右侧输尿管结石拟行手术治疗就诊。术前检测血常规、肝肾功能及肝炎病毒标志等均正常；凝血功能检测：APTT延长至121.5 s，而血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fb)及D－二聚体定量均正常，延长的APTT能被正常与患者1∶1混合的血浆纠正。进一步检查发现：凝血因子Ⅻ活性(FⅫ：C)及FⅫ抗原(FⅫ：Ag)含量均严重降低至1.4%，其他凝血因子(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ)活性均正常；血管性血友病因子活性(vWF：C)及抗原(vWF：Ag)含量正常；Ⅷ因子抗体、抗心磷脂抗体及抗核抗体等均为阴性。根据患者APTT明显延长，且能被正常及患者混合血浆纠正、FⅫ：C及FⅫ：Ag含量明显降低，诊断为FⅫ缺陷症。患者平时无明显出血症状，无长期服用药物史。询问其家系成员均无出血史，患者父母非近亲结婚，父亲因意外已故，检测母亲、舅父及姐姐APTT均在正常范围内。
对该患者进行FⅫ基因序列分析。(1)标本DNA制备：采集患者外周血，按常规酚－氯仿法抽提基因组DNA。(2)引物设计：根据FⅫ基因序列(GenBank AF538691)，设计7对引物以覆盖FⅫ基因的所有外显子区域及其侧翼序列[1]。(3)PCR扩增：0.1×PCR反应体系包括：1×PCR缓冲液，1.5 mmol/L MgCl2，0.25 mmoL/L dNTPs，引物终浓度0.5 mmol/L，500 ng DNA模板，2.5 U TaqDNA聚合酶。PCR反应在ABI 9700 DNA热循环仪上进行，反应条件：95℃预变性3 min；然后95℃变性30 s，68℃退火15 s，72℃延伸60 s，20个循环；继续95℃变性30 s，58℃退火15 s，72℃延伸60 s，16个循环；72℃延伸10 min。PCR产物在1.0%琼脂糖凝胶上电泳，120 V，30 min，在凝胶成像仪中成像，DL2000标记PCR产物大小。(4)测序：由北京海思特临床检验所进行测序(Sanger法)。应用Chromas软件将测序结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)所公布的基因序列进行比对，发现基因突变的序列则反向测序予以证实。(5)正常对照：男53名，女47名，平均年龄35(22～67)岁，均为健康体检者，无肝肾功能异常，无出血或血栓史。
测序结果显示：对患者PCR产物进行FⅫ基因所有14个外显子测序发现，第5外显子存在1个纯合型错义突变356G>C(Cys119Ser)，导致编码的第119位氨基酸由半胱氨酸变为丝氨酸(图1)；第7外显子出现619 G>C(Ala207Pro)错义突变(图2)；第9外显子附近内含子1018＋19delG出现缺失突变和1019－28T>C内含子突变(图3，图4)。通过检索PubMed上公开发表的有关FⅫ基因突变的文献和NCBI数据库显示，FⅫ基因第5外显子上的356G>C纯合突变为新的突变，推测其有致病性；第7外显子及第9外显子附近内含子的突变位点均为FⅫ基因的单核苷酸多态性(SNPs)位点，无致病性。100位健康对照者FⅫ基因第5、7外显子及第9外显子附近内含子测序均未发现上述突变，排除了基因多态性的可能。
FⅫ缺陷症是一种十分罕见的常染色体隐性遗传性出血性疾病，部分患者可表现为显性遗传，最早由Ratnoff于1955年报道，近年来有学者相继报道了FⅫ缺陷的FⅫ基因突变位点[2,3]，为其发病机制的研究奠定了基础。与其他凝血因子缺陷症不同，该病仅表现为检测时APTT延长，临床上并无严重出血，且部分患者出现血栓形成倾向，大多为脑动脉血栓及深静脉血栓，并认为FⅫ缺乏是血栓性疾病的发病风险之一[4]。本例患者平时因无明显皮肤黏膜出血倾向，凝血检查发现APTT明显延长且能被正常与患者的混合血浆纠正，说明为内源性凝血途径的凝血因子活性减低，且无抗凝物存在，进一步做凝血因子检测提示FⅫ：C和FⅫ：Ag含量均明显减低至1.4%，而其他凝血因子活性正常，提示FⅫ：C和FⅫ：Ag含量降低导致APTT延长。
SNPs是指基因组DNA序列中由于单个核苷酸替换而引起的多态性，具有高密度和高保守的特点，大多数SNPs位于基因组的非编码区，并且有些位于编码区的SNPs所致编码序列的改变并不影响翻译后的氨基酸序列，这种SNPs对个体的表现型并无影响。FⅫ基因的46C/T多态性的报道较多，其中46T/T可引起FⅫ：C减低[5]。本研究应用PCR扩增和Sanger测序方法检测发现，该患者并不存在上述FⅫ基因常见的46C/T多态性，而是在第7外显子发生619 G>C错义突变和第9外显子周围内含子1018＋19delG缺失突变及1019－28T>C内含子突变，经数据库检索均为SNPs位点且无临床致病性[5]，与该例遗传性FⅫ缺陷症的发病无关。
FⅫ基因定位于人类染色体5q33－qter区，由14个外显子和13个内含子组成。FⅫ基因纯合子或双杂合子突变携带者可表现为FⅫ：C缺乏，单纯杂合突变携带者可表现为一半的FⅫ活性，且在大多数FⅫ：C<1%的患者中FⅫ：Ag也检测不到。遗传性FⅫ缺陷基因突变的报道以国外为主[6]，超过57种，如exon3：224(T>C)、exon9：5281delG、exonl3：11185C>T等，国内有关报道较少。本研究对患者的基因测序结果显示，FⅫ基因第5外显子上发生356G>A纯合型错义突变，导致第119位上的半胱氨酸被丝氨酸替换，最终使得合成的FⅫ活性显著降低，进而APTT明显延长，检索国内外文献及NCBI数据库提示，目前FⅫ缺陷症尚未见此类突变的报道，该突变具有临床致病性，可能是遗传性FⅫ缺陷症的发病机制之一。
