探索用荧光原位杂交(FISH)技术分析大剂量照射后Calyculin A(CA)诱导的早熟凝集染色体的可行性。
采用X射线照射离体外周血，吸收剂量为0、1、5、10、15和20 Gy。RPMI 1640培养基培养，CA诱导染色体早熟凝集，1、4号全染色体探针荧光原位杂交，荧光显微镜下观察，计数畸变阳性细胞数及两条染色体断片数，拟合剂量效应曲线。
以阳性细胞作为观察对象，剂量范围在0～15 Gy时，阳性细胞数和照射剂量呈现良好的剂量-效应关系，Y＝0.008＋0.065D＋1.858×10–5D2(R2＝0.994)。以断片数作为观察对象，剂量范围在0～20 Gy时，同样呈现良好的剂量-效应关系：Y＝–0.032＋0.216D–0.01D2(R2＝1.0)。
用FISH分析CA诱导的早熟凝集染色体，可用于估算大剂量照射后的生物剂量。
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用双着丝粒染色体和着丝粒环作为生物剂量估算的金标准，估算急性均匀照射情况下的生物剂量非常准确，但在照射剂量超过5 Gy的大剂量照射事故时，由于受照人员外周血淋巴细胞急剧减少、细胞周期阻滞、细胞凋亡和间期细胞死亡、取样时间等因素很难获得足够的中期分裂相，用双着丝粒等染色体畸变进行分析有很大局限性。陈英等[1]通过延长培养时间到72 h建立了特大剂量照射后的剂量–效应曲线，但是染色体畸变可能会随着培养时间的延长而丢失，从而影响剂量估算的准确性。近年来大剂量受照后，早熟凝集染色体(PCC)成为生物剂量估算的一种重要方法，目前国内外对电离辐射诱导PCC的研究中，观察指标主要有PCC环和PCC断片，但是由于PCC染色体在G1期以单体形态存在，计数PCC断片需要花费大量的时间精力；此外，PCC环的形态各异，有实心环、肾形环、空心环等，计数PCC环同样比较繁琐。荧光原位杂交技术(FISH)可以在荧光显微镜下直观地看到标记染色体的畸变情况，本实验拟用Calyculin A(CA)联合秋水仙素诱导大剂量照射后的早熟凝集染色体，收获制片以后用荧光原位杂交(FISH)技术分析早熟凝集染色体(PCC)，建立剂量–效应曲线，为大剂量受照后生物剂量的估算提供一种新的方法。
