应用技术
基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测新技术及初步应用
中华微生物学和免疫学杂志, 2016,36(10) : 775-778. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.10.011
摘要
目的

建立一种可替代快速荧光灶抑制试验(RFFIT法)的简易高通量狂犬病病毒中和抗体(RVNA)检测技术。

方法

我们构建了表达荧光素酶报告基因与CVS-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒,建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术(改良RFFIT方法),与标准RFFIT方法结果平行比较,并进一步应用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中和抗体检测。

结果

改良RFFIT方法与标准RFFIT方法平行检测的46份待检血清与5份阴性参比血清,符合率为100%,且使用CVS-11假病毒测得的样品RVNA数值与标准RFFIT所得数值高度相关(n=46, r=0.94, P<0.000 1)。改良RFFIT方法用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中RVNA滴度测定,均为阳性,其平均IU值为33.01 IU/ml。

结论

基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测技术简易高效,可替代传统RFFIT方法。本研究中北京地区宠物犬与饲养人群91份样本均可检出明显的狂犬病病毒保护性中和抗体。

引用本文: 邓瑶, 吕新军, 于鹏程, 等.  基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测新技术及初步应用 [J] . 中华微生物学和免疫学杂志, 2016, 36(10) : 775-778. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.10.011.
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狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起的一种人兽共患传染病,狂犬病有很高的病死率,人类如果不在暴露前或暴露后进行有效地预防接种,一旦感染狂犬病病毒,病死率几乎为100%[1]。疫苗能够刺激机体产生针对狂犬病病毒包膜糖蛋白(GP)的中和抗体(RVNA),此中和抗体与活病毒感染后产生的可直接作用于病毒GP的中和抗体相同[2,3]。要评价疫苗的免疫原性和功效及接种时序的科学性,对RVNA滴度的测定是一项重要而不可或缺的工作。世界卫生组织(WHO)推荐快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)来体外评估血清中RVNA及药物抗病毒活性[1]。标准的RFFIT方法使用的是CVS-11株作为攻击病毒[4]。RFFIT方法也是我国现行药典规定的检测狂犬病病毒中和抗体的标准方法之一[1]。虽然RFFIT被认为是评价RVNA滴度的金标准,但这一方法需要昂贵的FITC标记的狂犬病病毒抗体(高品质的抗体供不应求),实验周期长而且涉及人工显微镜下观察;实验用到高致病性的狂犬病病毒,只能在生物安全水平3级(BSL-3)的实验室中进行。假病毒技术已被广泛用于研究病毒受体识别和细胞进入及抗体对病毒的中和作用[5,6,7,8]。因此,本研究中,我们构建了编码CVS-11包膜蛋白的表达质粒,制备了携带萤火虫荧光素酶报告基因的CVS-11假病毒,建立了基于荧光素酶CVS-11假病毒的改良型RFFIT方法,并进行了比较优化与应用。

 
 
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