微生物学
采用MALDI-TOF MS和全基因组测序鉴定和分析动弯杆菌属及其亲缘关系
中华微生物学和免疫学杂志, 2018,38(6) : 446-450. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2018.06.008
摘要
目的

用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术结合16S rRNA基因测序鉴定动弯杆菌,并通过全基因组测序分析动弯杆菌的耐药基因及该菌属种间亲缘关系。

方法

将65例细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)患者的阴道分泌物标本厌氧培养获得25株动弯杆菌,采用MALDI-TOF MS及16S rRNA基因测序鉴定细菌种属,并提取细菌全基因组DNA进行二代测序,测序后得到的原始数据根据SPAdes软件进行拼接组装,并与ARGD耐药基因库比对得到这些细菌含有的获得性耐药基因,最后通过Harvest软件对所有菌株进行核心基因组多样性比较,构建进化树。

结果

采用MALDI-TOF MS鉴定动弯杆菌属仅能获得柯氏动弯杆菌的鉴定结果;采用16S rRNA基因测序能将动弯杆菌属菌株区分为柯氏动弯杆菌和羞怯动弯杆菌;全基因组分析显示动弯杆菌主要含有四环素耐药基因tet(o)及大环内酯类耐药基因erm(x),其中tet(o)基因的检出率为84.7%,erm(x)基因的检出率为61.5%;动弯杆菌属两个种内亲缘关系相近,种间亲缘关系甚远。

结论

本实验结果表明目前MALDI-TOF MS不能鉴定出动弯杆菌属中的羞怯动弯杆菌;动弯杆菌对四环素类及大环内酯类抗生素具有潜在的耐药性;动弯杆菌在种内进化缓慢,暂无新种出现的趋势。

引用本文: 张雪英, 叶红, 李爱云, 等.  采用MALDI-TOF MS和全基因组测序鉴定和分析动弯杆菌属及其亲缘关系 [J] . 中华微生物学和免疫学杂志, 2018, 38(6) : 446-450. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2018.06.008.
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动弯杆菌是1984年命名的专性厌氧菌,隶属于放线菌纲(Actinobacteria)、放线菌目(Actinomycetales)、放线菌亚目(Actinomycineae)、放线菌科(Actinomycetaceae)。模式菌种为柯氏动弯杆菌(Mobiluncus curtisii)。动弯杆菌首次分离自女性生殖道,目前属内包括柯氏动弯杆菌(Mobiluncus curtisii)和羞怯动弯杆菌(Mobiluncus mulieris)两个种。柯氏动弯杆菌革兰染色不定,菌体平均长1.7 μm;羞怯动弯杆菌革兰染色阴性,菌体平均长2.9 μm。由于动弯杆菌生长条件苛刻,专性厌氧、生长缓慢、不易培养和鉴定,因此往往被临床忽视[1]。阴道内动弯杆菌等多种厌氧或兼性厌氧菌增多导致阴道正常乳酸菌减少或消失可引起细菌性阴道病(bacterial vaginosis, BV)[2,3,4],Nugent评分是诊断BV的金标准,主要依据阴道分泌物革兰染色后镜下所见乳杆菌、革兰染色阴阳不定小杆菌(包括阴道加德纳菌、普雷沃菌等)、动弯杆菌这3种菌的数量计算积分。动弯杆菌是参与Nugent评分的3类细菌中的其中之一,与细菌性阴道病关系密切[2,4,5,6]。由于动弯杆菌与多种厌氧菌或兼性厌氧菌共同存在于BV阴道分泌物中,而且动弯杆菌生长缓慢、菌落细小,不易进行纯培养,所以国内外文献中有关BV中动弯杆菌的报道较少,本研究拟用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)及全基因组测序鉴定和分析动弯杆菌属,探索能准确、快捷鉴定动弯杆菌的方法并了解动弯杆菌的耐药情况,以加强临床诊治。

 
 
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