制备流感病毒经典重配过程中所需的X-157母本株血凝素蛋白(Hemagglutinin, HA)抗血清。
X-157株流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化HA蛋白,蔗糖连续密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE法鉴定纯化HA蛋白,免疫兔子收集抗血清,血凝抑制试验法 (Hemoglutination Inhibition assay, HI)测定抗血清效价,单向免疫扩散法(Single Radial Immunodiffusion,SIRD)鉴定HA抗血清纯度。
成功制备了高免疫原性X-157株HA蛋白,兔抗HA血清HI滴度可达2560,SIRD鉴定为高纯度HA抗血清。
制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础。
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流感病毒(Influenza Virus)是每年在全球范围内造成人畜严重死残的重要呼吸道病原体[1]。疫苗接种是预防流感病毒感染及减少疫情发生的重要干预手段[2,3]。流感病毒表面蛋白基因不断变异发生抗原漂移,因此世界卫生组织每年两次更新当年度季节性流感疫苗组分[1,4]。季节性流感病毒疫苗株是通过经典重配方法将疫苗骨架株(A/PR8/34等)与流行株进行重组[5],得到具有骨架株内部基因和流行株表面蛋白基因的疫苗株。中国目前尚不具备自主制备季节性流感病毒疫苗株的能力,每年使用的疫苗株为世界卫生组织推荐的当年度的北半球季节性流感疫苗株。由于我国是流感的高发国家,国外的疫苗株与我国流行株的匹配性较差。我国长期的监测数据显示7个流感流行季节只有2次疫苗株与流行株相匹配[6]。血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)是流感病毒表面蛋白,也是流感病毒主要抗原。制备流感病毒重配母本株高免疫原性HA蛋白得到高纯度高效价抗HA血清是通过经典重配方法制备中国自主季节性流感疫苗株的关键。