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HBV共价闭合环状DNA Real-time PCR检测方法比较
中华实验和临床病毒学杂志, 2017,31(1)
: 71-74. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.01.015
摘要
目的
比较HBV共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA, cccDNA) Real-time PCR检测方法。
方法
选择文献中常用的普通Taq-Man探针及Taq-Man MGB探针两种检测方法,合成引物及探针,制备质粒标准品,提取乙肝患者血清及肝组织标本HBV DNA,分别用质粒安全ATP依赖的DNA酶(Plasmid-safe ATP-dependent DNase, PSAD)酶切,进行敏感性、特异性及重复性检测验证。
结果
两种检测方法扩增质粒标准品均有良好线性关系(R2 0.989和0.976),重复性良好(CV<4%);检测PSAD酶切前后质粒、血清及肝组织HBV cccDNA均有良好特异性;检测相同浓度样品时普通Taq-Man探针Ct值较Taq-Man MGB探针略低。
结论
两种方法均可用于HBV cccDNA检测,本实验所用的普通Taq-Man探针较Taq-Man MGB探针敏感性略高;MGB探针本底更低。实际工作中可根据需求选择适宜的探针。
引用本文:
曹经琳,
窦剑,
周文亭,
等.
HBV共价闭合环状DNA Real-time PCR检测方法比较
[J]
. 中华实验和临床病毒学杂志, 2017, 31(1)
: 71-74.
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.01.015.
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