探讨下调NEK-2表达对非小细胞型肺癌A549细胞放射敏感性影响。
培养人非小细胞型肺癌A549细胞,通过siRNA技术沉默A549细胞中NEK-2的表达水平,通过蛋白印迹法实验进行验证。采用克隆形成实验检测放射增敏作用,用流式细胞技术检测下调NEK-2表达对辐射诱导A549细胞凋亡和周期的影响,采用免疫荧光实验检测DNA双链断裂和修复情况。
NEK-2 siRNA可明显下调A549细胞中NEK-2的表达水平。相对于空白对照组和阴性对照组,下调NEK-2表达能抑制肿瘤细胞的增殖能力,提高A549细胞的放射敏感性,平均致死剂量由1.80 Gy下降至1.40 Gy,放射增敏比值为1.32。下调NEK-2表达可提高因辐射诱导引起的凋亡水平(7.85%~17.17%),使细胞在G2/M期阻滞(9.23%~30.16%),使DNA双链断裂的数量增加至165%,使DNA双链损伤的修复效率下降至48%。
下调A549细胞中NEK-2表达水平能降低细胞的增殖能力,提高细胞放射敏感性,其作用机制可能与细胞周期变化、细胞凋亡以及DNA双链的断裂与修复有关。
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2015年的肿瘤统计数据显示我国新发肿瘤病例有429.2万,因肿瘤死亡人数约为281.4万,其中肺癌的新发病例和死亡病例分别为73万和61万。肺癌的发病率和死亡率均位居我国恶性肿瘤的首位,严重威胁患者的生存质量[1]。多数肺癌患者在确诊时往往处于中晚期,失去了手术治疗的最佳时期。因此,放疗成为肺癌患者的主要治疗方式,但是由于癌细胞对放疗的敏感性较低,导致现有放疗手段的治疗效果并不显著[2],而提高照射剂量会对癌旁的正常组织造成损伤[3]。基因靶向治疗联合放疗方案作为新的治疗方式越来越受到重视,寻找靶向性强和放射增敏效果强的增敏剂有助于提高肺癌细胞对放疗的敏感性,从而降低放射剂量,提高放疗效果[4]。中心体相关激酶2(NEK-2)是一种重要的细胞周期调控蛋白激酶,在多种肿瘤中呈高表达状态,且与肿瘤的发生、发展、转移、治疗及预后相关,是重要的肿瘤标志物之一[5,6,7,8,9,10,11,12]。研究发现下调NEK-2表达可有效阻止肿瘤的侵袭和转移,明显抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤治疗靶目标[13,14,15,16,17,18]。目前,下调NEK-2表达与肿瘤放射敏感性关系的相关报道较少。本研究通过siRNA技术体外沉默A549细胞内NEK-2表达,以探讨X射线照射对A549细胞增殖、凋亡,细胞周期,以及DNA修复能力的影响,并分析NEK-2与A549细胞放射敏感性的相关性。