利用高通量测序平台研究非小细胞肺癌（NSCLC）热点基因突变情况，系统性分析突变位点的分布、类型以及频度，评估突变位点致病性。
本研究共纳入94例NSCLC组织样本，均为2015年7月至2017年4月在山东大学齐鲁医院胸外科收集的非小细胞肺癌（NSCLC）石蜡包埋（FFPE）和新鲜组织样本。患者年龄在35~82岁之间，年龄中位数是61岁。男性63例，女性31例。选择22个基因：KRAS、EGFR、BRAF、PIK3CA、AKT1、ERBB2、PTEN、NRAS、STK11、MAP2K1、ALK、DDR2、CTNNB1、MET、TP53、SMAD4、FBXW7、FGFR3、NOTCH1、ERBB4、FGFR1和FGFR2。用Thermo fisher公司Ion Torrent测序平台的Ion Ampli Seq Colon and Lung Cancer Panel进行测序。Ion Torrent平台测序数据使用Ion torrent suite v4.4.2软件进行分析。
在NSCLC常见的22个突变基因中，TP53基因突变频率最高，约占所有突变的46.9%，其次是EGFR基因（占28.1%）；共检测出89种突变，包括63种热点突变（已报道的位点）和26种新发突变（未见报道的位点），其中检出频率最高的是EGFR基因的19号外显子缺失突变，其次是EGFR基因的Leu858Arg；分析EGFR基因的靶向用药位点的突变情况，结果显示EGFR的19号外显子的缺失突变检出次数最高，其次是21号外显子L858R突变；利用生物信息学软件分析了26种新发突变的致病性，结果显示除ATK1：c.47-12G>A和TP53：c.214C>G这两个位点以外，剩余的24种新发突变位点在基因保守性、氨基酸序列变化、蛋白结构影响三个方面至少有一项会对基因的功能产生重大影响。
本研究通过NGS对NSCLC多个敏感基因的突变位点进行联合检测，更能全面覆盖基因变异情况，为筛选最适宜靶向治疗的群体提供依据。新发突变的致病性预测以及所涉及的肿瘤相关信号通路的改变，为后续为进一步研究NSCLC致病机制提供参考。
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肺癌是全世界范围内最常见、病死率最高的恶性肿瘤。每年全球有160万人死于肺癌。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的80%~85%，然而近年来，尽管医疗技术不断进步，NSCLC的五年生存率却几乎没有任何改变[1]。早期NSCLC患者可通过手术、放疗、化疗和靶向药物进行干预，获得较好的预后，但肺癌患者的总体五年生存率仅约为21%[2]。以往治疗NSCLC的传统方案是以铂类为主的双药方案，但其临床应用因毒性及不良反应受到极大限制，同时治疗效果也已达到一个平台[3]。近年来，随着肺癌分子靶向药物研发的不断深入，分子靶向治疗给患者抗癌治疗带来了新的生机。经证明，针对特定靶点的分子靶向药物可以改善患者预后并提高其生存期，是治疗NSCLC的中坚力量[4]。例如针对表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor，EGFR-TKISs）：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼和奥西替尼等，用于治疗伴有EGFR突变的NSCLC患者，与传统的细胞毒类化疗药物相比，使用EGFR-TKIs具有更长的无疾病进展生存期（PFS）和总生存期（OS），且不良反应轻微，患者耐受性更好，生活质量明显提高，突破了传统化疗药物的弊端，已成为晚期NSCLC治疗的重要手段。但是有越来越多的研究发现部分患者在服用EGFR-TKISs几个月后出现获得性耐药。研究表明，获得性耐药的主要原因是EGFR酪氨酸激酶区域的20号外显子再次点突变[5]。除EGFR-TKIs之外，还有4类非小细胞肺癌的靶向药物经美国FDA或我国CFDA批准上市，他们分别是：针对间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）抑制剂、针对人血管内皮生长因子（VEGF）的靶向药物、针对人血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的靶向药物以及免疫治疗药物[6]。在强调个体化治疗的时代，这些关键基因的突变检测，不止EGFR突变检测，其他驱动肺癌的相关基因突变的联合检测分析，将对NSCLC患者的个体化用药和预后起到至关重要的作用。
