实验研究
全组织包埋免疫荧光染色技术在小鼠淋巴管形态研究中的应用
中华整形外科杂志, 2019,35(7) : 681-685. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-4598.2019.07.014
摘要
目的

探讨全组织包埋免疫荧光染色技术在淋巴管荧光染色的特点和优势。

方法

从正常C57小鼠上分别获取耳部皮肤组织、后肢淋巴管和肠系膜淋巴管,将这些组织样本进行全组织包埋免疫荧光染色,经多聚甲醛固定、封闭液封闭、一抗二抗不同时间孵育,在共聚焦激光显微镜下观察小鼠毛细淋巴管和集合淋巴管的解剖结构。

结果

经过全组织包埋免疫荧光染色的耳部皮肤能清晰显示毛细淋巴管内皮细胞及其盲端,后肢集合淋巴管和肠系膜淋巴管还能清晰地显示淋巴管及其平滑肌和瓣膜。

结论

全组织包埋免疫荧光染色技术既能清晰、立体地观察到淋巴管外部形态,又能深入细微地观察淋巴管内部结构,从而更精准地研究淋巴管的生理病理改变。

引用本文: 孙笛, 袁兆琪, 赵蒙蒙, 等.  全组织包埋免疫荧光染色技术在小鼠淋巴管形态研究中的应用 [J] . 中华整形外科杂志, 2019, 35(7) : 681-685. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-4598.2019.07.014.
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近十余年来,世界范围内众多专业机构开展了对淋巴系统的形态功能、生理病理等多方面的研究,尤其是尝试采用各种技术观察研究淋巴管的结构形态、走行分布[1]。淋巴管的观察可分为宏观和微观2种方式,宏观观察是在淋巴管内直接注射示踪剂、造影剂或染料灌注剂后,以肉眼或借助影像仪器观察淋巴管的形态特点,该方式注重淋巴管的外部特点、分布走行和舒缩功能[2]。微观观察则是将目标组织制备成切片,利用免疫组织化学和酶组织化学等方法,深入观察淋巴管的细微改变,该方式多注重淋巴管的横断面结构特点[3,4]。但在许多研究中,不仅要关注淋巴管走行和毗邻组织的关系,还要明确毛细淋巴管的形态、淋巴管平滑肌和瓣膜的结构特点。全组织包埋(Whole-Mount)免疫荧光染色是无需将组织样本包埋切片,保持完整地进行免疫荧光染色的实验技术,被广泛应用于神经、骨、软骨、消化道组织等研究观察,可完整地观察组织样本整体和局部、外部和内部的结构改变[5,6,7,8,9]。但该技术在我国尤其是淋巴系统研究方面未见相关报道。我们的研究利用Whole-Mount免疫荧光染色技术将整块组织进行特殊处理,直接进行抗体免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下多层扫描,构建成三维图像,从而观察毛细淋巴管和集合淋巴管的内外部结构特点。

 
 
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