基础研究
MicroRNA-29a在脂多糖诱导人单核细胞凋亡中的作用和机制
中华急诊医学杂志, 2013,22(01) : 40-45. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.01.009
摘要

目的 探讨microRNA-29a (miR-29a)对人单核细胞株THP-1凋亡的作用及其机制.方法 体外培养人单核细胞株THP-1和人胚肾细胞株293T,合成人miR-29a的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor).用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a的mimic或inhibitor进入THP-1细胞,分组处理后收集细胞标本.第1组细胞转染mimic (100 nmol/L) 48 h;第2组细胞先转染inhibitor(100 nmol/L) 24 h,再用脂多糖(LPS)诱导24h,分别用流式细胞仪方法检测两组细胞凋亡,用real time RT-PCR方法检测抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达变化.构建Bcl-2和Mcl-1的荧光素酶报告基因载体,用脂质体Lipofectamine 2000转染293T细胞(DNA质粒和miRNA片段共转染),双荧光素酶报告基因系统(luciferase)检测荧光素酶的表达变化.应用SPSS 13.0统计软件,采取单因素方差分析或t检验进行数据统计分析.结果 THP-1细胞转染miR-29a的mimic48 h后,细胞凋亡较对照组增加(17.38%增加至42.06%);单独用LPS诱导THP-1细胞,24 h后细胞凋亡较对照组增加;THP-1细胞先转染inhibitor 24 h后,再用LPS诱导24 h,细胞凋亡较单独用LPS诱导组减少(由51.50%降至38.09%);THP-1细胞转染miR-29a的mimic后,抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达水平降低明显(P<0.05).另外,Luciferase检测结果显示,在293T细胞中,双萤光报告系统显示miR-29a可特异抑制带有Bcl-2和Mcl-13'UTR上野生型识别元件的报告基因表达(P<0.05).结论 上调miR-29a的表达水平能促进THP-1细胞发生凋亡,下调miR-29a的表达水平则能抑制LPS诱导的THP-1细胞凋亡,miR-29a调控THP-1的凋亡水平是通过靶向于两个抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1实现的,提示miR-29a在调控免疫细胞的凋亡过程中具有重要的作用。

引用本文: 熊旭明, 张振辉, 江子欣, 等.  MicroRNA-29a在脂多糖诱导人单核细胞凋亡中的作用和机制 [J] . 中华急诊医学杂志,2013,22( 01 ): 40-45. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.01.009
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