观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞(GSCs)迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制。
将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养，使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性的胶质瘤细胞，免疫荧光染色检测CD133及巢蛋白鉴定GSCs。将携带Notch1抑制物核苷酸序列(shRNA-Notch1)、阴性对照核苷酸序列(shRNA-NC)的重组慢病毒转染至体外培养的U87来源的GSCs中，分别作为shRNA-Notch1组、shRNA-NC组，同时设不做处理的空白对照组，在成球后行通过荧光定量PCR检测3组细胞Notch1 mRNA的表达；Western blotting检测3组细胞Notch1、Hes1、Akt、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白的表达；Transwell细胞迁移和侵袭实验观察3组细胞迁移和侵袭能力的强弱。
免疫荧光染色检测显示肿瘤细胞球阳性表达神经干细胞标志物CD133和巢蛋白。与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组GSCs的Notch1 mRNA和蛋白、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)，而Akt蛋白水平没有明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组穿膜的细胞数目降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
抑制Notch1通路活性后可能通过PI3K通路来调节GSCs的迁移和侵袭能力。
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恶性胶质瘤是最为常见的原发性中枢神经系统肿瘤，占颅内肿瘤的30%~50%，属于预后极差的人类肿瘤之一。对放化疗的抵抗及术后复发是患者预后差的根本原因。胶质瘤干细胞(glioma stem cells，GSCs)是一群具有自我更新、无限增殖、多向分化能力的肿瘤细胞，决定着胶质瘤的侵袭性和对放化疗的抵抗，而向胶质瘤周围迁移和侵袭的GSCs也被认为是术后胶质瘤复发的"种子细胞"[1]。本课题组前期研究也发现，相较于CD133-的胶质瘤细胞，CD133+细胞具有更高的迁移及侵袭能力[2]。因此通过对GSCs的深入研究，可以从新的角度来认识胶质瘤侵袭性的生长方式，从而为恶性胶质瘤的治疗提供新的治疗靶点。Notch信号通路对GSCs恶性表型的维持起着关键作用，其中Notch1在胶质瘤中的表达强度随着病理分级升高而升高，并与患者的生存情况相关[3,4,5]，但Notch1信号通路活化后对GSCs迁移和侵袭能力的影响目前却鲜有研究。本研究旨在探讨Notch1信号通路与GSCs迁移和侵袭能力的关系及其潜在机制。
