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不同免疫表型多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析
肿瘤研究与临床, 2018,30(3) : 176-179. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2018.03.008
摘要
目的

探讨检测不同免疫表型的多发性骨髓瘤（MM）患者外周血淋巴细胞亚群的临床意义。

方法

以2016年1月至6月新疆维吾尔自治区人民医院40例MM患者为研究对象，20名健康体检者为对照组，采集骨髓及外周血样本后行流式细胞术进行抗原表达和淋巴细胞亚群检测，分析患者的免疫表型及MM组和对照组之间淋巴细胞亚群各指标的差异。

结果

CD138、CD38、CD56、CD19、CD20、CD45在MM组和对照组中表达分别为100%（40/40）、100%（40/40）、75%（30/40）、0、20%（8/40）、0和100%（20/20）、100%（20/20）、0、100%（20/20）、100%（20/20）、75%（15/20）；MM组免疫表型可分为CD138+ CD38+ CD56- CD19-（10例）和CD138+ CD38+ CD56+ CD19-（30例）两类。MM组中CD3+[（924±341）个/ml比（1 474±270）个/ml]、CD4+[（410±163）个/ml比（871±214）个/ml]、CD4+/CD8+[（1.0±0.3）个/ml比（1.6±0.5）个/ml]、CD19+[（72±26）个/ml比（277±89）个/ml]的绝对计数值小于对照组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。MM组中不同免疫表型患者的外周血淋巴细胞亚群各指标绝对计数值间比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。

结论

流式细胞术检测可对MM患者进行准确的免疫分型，能更好地区分良、恶性浆细胞，辅助临床对浆细胞骨髓瘤患者进行诊断。结合淋巴细胞亚群分析可反映MM患者的免疫功能状态。

引用本文: 黄国虹, 李智伟, 王昌敏. 不同免疫表型多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析 [J] . 肿瘤研究与临床, 2018, 30(3) : 176-179. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2018.03.008.
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多发性骨髓瘤（MM）是一种B细胞起源的浆细胞增生性疾病，约占血液系统恶性肿瘤的10%。其主要表现为恶性的浆细胞（PC）在骨髓中大量增殖，破坏骨髓造血功能、分泌过量单克隆免疫球蛋白、产生溶骨性破坏[1]，进而导致贫血、感染、肾功能受损等临床症状。MM患者常伴有明显的免疫功能异常[2]。我们采用流式细胞术对MM患者进行免疫分型，并探讨不同免疫表型MM患者细胞免疫功能之间的差异，为临床MM的诊断及患者免疫功能的监测提供更加准确的实验室依据。

1　资料与方法
1.1　一般资料

以2016年1月至6月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院血液科的初诊MM患者为研究对象。MM诊断标准参照2011版《中国多发性骨髓瘤诊治指南》。MM组40例患者中男性22例，女性18例，年龄47~76岁，平均年龄（58±9）岁；以同期健康体检者20名为对照组，其中男性11名，女性9名，年龄34~78岁，平均年龄（52±12）岁。本研究取得医院伦理委员会批准和受试者知情同意。

1.2　方法
1.2.1　仪器和试剂

FACS CantoⅡ多色流式细胞仪、荧光标记鼠抗人单克隆抗体（CD138-APC、CD38-FITC、CD56-PE、CD45-PerCP、CD19-PE-Cy7、CD20-APC-Cy7、IgGcκ-PE、IgGcλ-FITC）、溶血素、破膜剂均购自美国Becton Dickinson公司，采用FACS Dvia软件进行分析。

1.2.2　流式细胞术检测抗原表达情况

用乙二胺四乙酸（EDTA）-K2抗凝管抽取新鲜骨髓样本3 ml，300目尼龙膜过滤后备用。取2只检测管，每管取100 μl骨髓样本加不同组合抗体各20 μl（CD38-FITC、CD56-PE、CD45-PerCP、CD138-APC、CD19-PE-Cy7、CD20-APC-Cy7；IgGcλ-FITC、IgGcκ-PE、CD45-PerCP、CD138-APC、CD19-PE-Cy7），混匀，避光15 min，溶血、洗涤后上机检测分析，荧光微球校准仪器标准及补偿后，用FACS Dvia软件每管至少获取10万个细胞，通过CD138/CD38、CD45/SSC联合设门，确定瘤细胞的位置及抗原表达情况。

1.2.3　淋巴细胞亚群检测

取2只检测管，准确加入50 μl EDTA-K2抗凝全血，分别加入20 μl抗体（CD3-FITC、CD8-PE、CD45-PerCP、CD4-APC）和（CD3-FITC、CD16+56-PE、CD45-PerCP、CD19-APC），混匀，25 ℃室温下避光培养15 min，然后加入溶血素450 μl，混匀，25 ℃室温下避光培养15 min，上机分析。

1.3　统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析，计数资料用百分数（%）表示，比较采用χ2检验。计量资料符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果
2.1　MM组和对照组抗原表达情况

以CD138/CD38设门可以直观准确地圈定CD38+ CD138+细胞群为浆细胞群，根据CD45/SSC可再次确认相应位置的准确性（图1）。

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图1
以CD138/CD38、CD45/SSC联合设门观察多发性骨髓瘤患者抗原表达情况
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图1
以CD138/CD38、CD45/SSC联合设门观察多发性骨髓瘤患者抗原表达情况

CD138、CD38、CD56、CD19、CD20、CD45在MM组和对照组中表达分别为100%（40/40）、100%（40/40）、75%（30/40）、0、20%（8/40）、0和100%（20/20）、100%（20/20）、0、100%（20/20）、100%（20/20）、75%（15/20），其中MM组cλ型[73%（29/40）]多于cκ型[28%（11/40）]；对照组中cκ型和cλ型均为100%（20/20）。两组比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。

2.2　MM组中不同免疫表型患者抗原表达情况

40例MM患者按照CD138、CD38、CD56、CD19表达情况可以分为两类：CD138+ CD38+ CD56- CD19- 10例（25%），CD138+ CD38+ CD56+ CD19- 30例（75%），两组阳性表达率比较差异有统计学意义（χ2=18.1，P=0.0）。

2.3　不同免疫表型MM患者和对照组外周血淋巴细胞亚群绝计数结果比较

与对照组相比，MM组中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD19+的绝对计数值小于对照组，差异均有统计学意义（均P<0.05）；两组CD8+和CD16+/CD56+绝对计数值差异无统计学意义（均P>0.05）。不同免疫表型MM患者外周血淋巴细胞亚群各指标绝对计数值差异均无统计学意义（均P>0.05）（表1）。

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表1

不同免疫表型多发性骨髓瘤（MM）患者与健康对照组外周血淋巴细胞亚群绝对计数比较（个/ml，±s）

表1

不同免疫表型多发性骨髓瘤（MM）患者与健康对照组外周血淋巴细胞亚群绝对计数比较（个/ml，±s）

组别例数CD3+CD8+CD4+CD4+/CD8+CD19+CD16+/CD56+
MM组 924±341499±249410±1631.0±0.372±26217±66
 CD138+ CD38+ CD56+ CD19-30947±376503±269429±1761.0±0.183±18224±66
 CD138+ CD38+ CD56- CD19-10855±185489±177355±960.9±0.536±9195±61
对照组       
 CD138+ CD38+ CD56- CD19+201 474±270573±145871±2141.6±0.5277±89217±73
F值 18.86.920.111.258.210.1
P值 0.00.80.00.00.00.7
3　讨论

MM是单克隆浆细胞异常增殖导致单克隆免疫球蛋白异常增高的一种恶性肿瘤[3]。浆细胞来源于B细胞，是B细胞分化的终末阶段，在其分化过程中伴随着某些特异性抗原或免疫球蛋白的丢失，表现出抗原异质性，使临床表现不典型而难以诊断[4]。流式细胞术可快速、准确地检测正常浆细胞以及肿瘤细胞的生物学特性，从而对MM进行免疫分型。CD38/CD138和SSC/CD45联合设门可以大大提高浆细胞的检出率。本组采用CD38/CD138和SSC/CD45联合设门的方法对40例MM患者进行免疫分型，结果显示与正常浆细胞表达CD138+ CD38+ CD56- CD19+的免疫表型[5]相比，MM患者中出现了CD138+ CD38+ CD56+ CD19-典型免疫表型和CD138+ CD38+ CD56- CD19-不典型免疫表型。

CD56是介导造血细胞的黏附分子之一，是抗原表达中显著区分良性浆细胞和骨髓瘤细胞的标志[6]，将其与CD45和CD19等结合起来检查表达阳性率，可为MM的诊断和分型提供重要依据。本研究结果中出现的CD56阴性不典型免疫表型提示，尽管CD56阳性有助于MM的诊断，但是CD56阴性时不能除外MM，还应该结合其他特征进行综合分析[7,8,9]。

有研究发现，CD56表达与疾病侵袭性及治疗预后有关[10,11]。CD56阳性患者预后较好，而CD56阴性患者是特殊群体，疾病更具有侵袭性，总生存期明显缩短。CD56阳性或阴性的MM患者免疫功能是否存在差异，目前鲜见报道。MM患者机体抗肿瘤免疫反应以细胞免疫为主，T淋巴细胞亚群对机体的免疫应答调控和维持免疫稳定具有重要作用[12]。其中CD3阳性细胞代表T淋巴细胞总数；CD4阳性细胞在免疫应答中是主要反应细胞，具有增强和扩大其他免疫细胞的功能、CD8阳性细胞对靶细胞介导细胞毒作用以及CD4细胞具有调节性抑制作用；CD4+/CD8+可反映机体细胞免疫功能状态，只有平衡时才能发挥抗肿瘤作用；CD19+和CD16+/CD56+则为B细胞和自然杀伤细胞的标志。本研究中MM组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD19+的绝对计数值降低，而CD8+、CD16+/CD56+绝对计数值升高，表明MM患者处于疾病的进展期，免疫功能降低，该结果与国内其他报道结果一致[13]。但MM组中不同免疫表型患者的淋巴细胞亚群绝对计数值差异并无统计学意义，可能与特殊免疫表型病例数较少有关。

由于如CD138+ CD38+ CD56- CD19-不典型免疫表型MM病例少见，认识较少，借助流式细胞术的优势可以进一步细化MM免疫表型分型，结合淋巴细胞亚群分析，可为MM患者的诊断、分型、治疗、预后提供更有价值的帮助。

利益冲突

利益冲突　无

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