通过血栓弹力图(thromboelastography,TEG)结果分析凝血紊乱与脓毒症严重程度、器官功能障碍和预后的关系。
收集2014年2月至2015年1月我院PICU诊断脓毒症和严重脓毒症患儿(n=62)的临床资料,于诊断脓毒症当天(D1)、第2天(D2)、第3天(D3)检测患儿血常规、炎症指标(C-反应蛋白、降钙素原)、器官功能指标(ALT、TBiL、ALB、Cr、BUN、PaO2/FiO2)、乳酸、传统凝血功能检测指标(APTT、PT、INR、Fib、D-dimers)、TEG指标(R、K、α、MA、LY30、CI)。(1)比较脓毒症、严重脓毒症组组间D1~3 TEG结果;比较低凝、高凝组组间D1炎症指标、D1危重评分。(2)比较低凝、高凝组组间D1器官功能指标(ALT、TBiL、ALB、Cr、BUN、PaO2/FiO2)、D1~3 儿童多器官功能障碍评分和器官功能障碍数目。(3)比较存活、死亡组组间D1~3 TEG结果;采用Kaplan-Meier生存曲线、Log Rank检验分析D1CI和APTT、PT结果与脓毒症28 d生存率的关系。
(1)凝血紊乱与脓毒症严重程度的关系:严重脓毒症组(n=21)较脓毒症组(n=41)D1~3TEG结果呈持续低凝状态: D1~2R及D1、D3K延长,D1~3α减小,D1~3MA、CI降低(P<0.05);低凝组(n=16)D1PRISM Ⅲ高于高凝组(n=26)(P<0.05);低凝组D1中性粒细胞计数低于高凝组(P<0.05)。(2)凝血紊乱与多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的关系:低凝组D1器官功能损害重于高凝组:D1 Cr、BUN、ALT升高(P<0.05);低凝组D1儿童多器官功能障碍评分、D1~3器官功能障碍累积数目高于高凝组(P<0.05)。(3)凝血紊乱与脓毒症预后的关系:低凝组病死率高于高凝组(62.5% vs.15.4%,P=0.002);死亡组(n=18)较存活组(n=44)D1~3TEG结果呈持续低凝状态:D1~2R及D1、D3K延长,D1~3α减小,D1~3MA、CI降低(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示低凝、高凝、正常组28d生存曲线分布差异有统计学意义(P<0.05)。
TEG结果呈持续低凝状态可反映患儿脓毒症和MODS严重程度,TEG对预测脓毒症28 d预后有参考价值。TEG对于综合判断脓毒症严重程度、MODS和预测脓毒症转归具有重要意义。
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脓毒症是感染造成机体过度的全身炎症反应综合征。炎症反应的强度不仅与引起感染的病原菌种类有关,也与机体的免疫功能和遗传基因有关。早期炎症反应和凝血激活是机体对病原微生物感染的宿主防御。然而在脓毒症进程中,过度的炎症反应与凝血紊乱相互作用,形成脓毒症炎症-凝血网络,加重机体多器官功能障碍 [1,2]。
近年来有报道,血栓弹力图(thromboelastography,TEG)较传统凝血功能检测(classical coagulation laboratory tests,CCTs)可早期发现脓毒症凝血紊乱[3,4]。TEG检测呈低凝状态与患者血液中内皮细胞损伤的标记物具有正相关性[5]。但TEG检测的凝血紊乱与脓毒症严重程度、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)及预后间的关系相关报道少见。本研究就脓毒症凝血紊乱与脓毒症严重程度、MODS及预后间的关系进行研究,探讨TEG对脓毒症凝血紊乱检测的意义。
纳入标准:(1)2014年2月至2015年1月收入我院PICU符合脓毒症、严重脓毒症诊断的患儿;(2)年龄大于28d,纠正胎龄大于41周的早产儿,小于18岁。排除标准:(1)先天性凝血功能障碍;(2)长期使用抗凝药物(肝素、华法林、抗凝血酶等)者;(3)血液肿瘤及造血干细胞移植后患者;(4)肝脏疾病及肝脏移植后患者。本研究方案获医院伦理委员会批准(批件号SCMCIRB-K2014038)。
脓毒症、严重脓毒症诊断根据2012严重脓毒症和脓毒性休克管理国际指南(以下简称指南)[6];于诊断脓毒症当天(D1)、第2天(D2)、第3天(D3)予以危重症评分和MODS评分:危重症评分采用国内小儿危重病例评分法(PCIS评分) [7]和第三代小儿死亡危险评分[8](PRISM Ⅲ评分);采用儿童多器官功能障碍评分(podiatric multiple organ dysfunction score,P-MODS)[9]判断器官功能障碍的程度(表1)。
项目 | 评分 | ||||
---|---|---|---|---|---|
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | |
乳酸(mmol/L) | <1 | 1~2 | 2~5 | 5.0~7.5 | >7.5 |
PaO2/FiO2(mmHg) | >150 | 150~100 | 100~75 | 75~50 | <50 |
胆红素(μmol/L) | <8.5 | 8.5~34.2 | 34.2~85.5 | 85.5~171.0 | >171 |
纤维蛋白原(mg/L) | >1 500 | 1 500~1 250 | 1 250~1 000 | 1 000~750 | <750 |
尿素氮(mmol/L) | <7.10 | 7.10~14.3 | 14.3~21.4 | 21.4~28.5 | >28.5 |
患儿临床资料包括性别、年龄、PCIS、PRISM Ⅲ、脓毒症严重程度(脓毒症或严重脓毒症)、P-MODS评分、器官障碍累积数目。于D1、D2、D3检测患儿血常规、炎症指标(CRP、PCT)、器官功能指标(ALT、TBiL、ALB、Cr、BUN、PaO2/FiO2)、乳酸、CCTs指标(APTT、PT、INR、Fib、D-dimers)、TEG指标(R、K、α、MA、LY30、CI)。
所有检测均在留取标本后2 h内完成。TEG检测采用美国Haemoscope公司TEG®5000检测仪。R、K和α、MA、LY30(60)分别反映初始血凝块形成、血凝块形成的速率、依赖血小板GP-Ⅱb/Ⅲa的血凝块强度、血凝块纤溶状态。CI以R、K、MA和α为基础,采用不同激活剂行TEG检测对应不同CI的计算公式。本研究以高岭土作为激活剂,CI计算公式:0.6516R-0.3772K+0.1224MA+0.075α-7.7922。CI>+3提示血液处于高凝状态,CI<-3提示血液处于低凝状态[10]。CCTs检测采用日本Sysmex公司CA-1500全血凝分析仪。
根据指南将脓毒症患儿分为脓毒症组、严重脓毒症组;根据TEG®5000用户手册推荐CI将纳入患儿分为高凝组(CI>+3)、低凝组(CI<-3)和正常组(-3≤CI≤+3)[10];根据28 d预后分为存活组和死亡组。
采用IBM SPSS21.0统计软件,计数资料结果以百分比表示,采用卡方检验。非正态分布资料用中位数(四分位数间距)[M(P25-P75)]表示,组间比较采用秩和检验。凝血功能检测指标与脓毒症预后采用Kaplan-Meier生存分析,并绘制生存曲线,Log Rank法比较研究因素生存曲线间差异,P<0.05为差异有统计学意义。
共纳入脓毒症患者62例,其中脓毒症组41例、严重脓毒症组21例。严重脓毒症组较脓毒症组D1~3TEG结果呈持续低凝状态:D1~2R及D1、D3K延长,D1~3α减小,D1~3MA、CI降低(P<0.05),见表2。
指标 | 脓毒症组(n=41) | 严重脓毒症组(n=21) | Z值 | P值 | |
---|---|---|---|---|---|
R(min) | |||||
D1 | 4.1(3.2-5.5) | 7.6(3.7-11.5) | -2.613 | 0.009 | |
D2 | 3.8(2.9-4.9) | 5.6(3.8-8.3) | -2.847 | 0.004 | |
D3 | 4.0(3.6-5.2) | 4.1(3.4-8.5) | -0.715 | 0.481 | |
K(min) | |||||
D1 | 1.1(0.9-1.8) | 1.8(1.2-5.9) | -2.944 | 0.003 | |
D2 | 1.1(0.8-1.9) | 1.7(1.2-3.3) | -2.283 | 0.22 | |
D3 | 1.1(0.9-1.6) | 2.5(1.5-3.1) | -3.446 | <0.001 | |
α(°) | |||||
D1 | 74.4(67.6-77.4) | 57.7(26.8-71.4) | -3.772 | 0.001 | |
D2 | 71.4(63.9-77.8) | 66.6(42.2-73.2) | -2.697 | 0.007 | |
D3 | 73.7(65.8-77.5) | 67.7(54.6-68.7) | -2.758 | 0.005 | |
MA(mm) | |||||
D1 | 66.7(56.3-72.0) | 44.7(30.8-63.9) | -3.326 | 0.001 | |
D2 | 64.5(56.8-67.8) | 53.8(40.2-58.2) | -3.357 | 0.001 | |
D3 | 66.6(58.3-70.0) | 50.0(47.0-60.8) | -3.157 | 0.001 | |
CI | |||||
D1 | 3.2(0.4-3.8) | 0.3(-9.2-2.9) | -2.546 | 0.011 | |
D2 | 2.4(0.6-3.6) | 0.4(-3.2-2.2) | -2.450 | 0.014 | |
D3 | 2.4(0.7-3.9) | -0.8(-2.7-1.0) | -3.157 | 0.001 |
62例脓毒症患儿中,高凝组26例、低凝组16例、凝血正常组20例。低凝组D1PRISM Ⅲ高于高凝组(P<0.05);两组间D1PCIS差异无统计学意义,见表3。
分组 | 例数 | PCIS | PRISM Ⅲ |
---|---|---|---|
高凝组 | 26 | 88(78-90) | 4.0(4.0-8.0) |
低凝组 | 16 | 79(65-86) | 9.5(7.3-18.0) |
Z值 | -1.80 | -3.484 | |
P值 | 0.075 | <0.001 |
低凝组D1中性粒细胞绝对计数低于高凝组(P=0.031);而WBC、CRP、PCT两组间差异无统计学意义,见表4。
分组 | 例数 | WBC(×109/L) | 中性粒细胞绝对计数(×109/L) | CRP(mg/L) | PCT(ng/ml) |
---|---|---|---|---|---|
高凝组 | 26 | 15.3(11.0-23.0) | 12.9(5.8-17.6) | 44.0(11.5-90.5) | 0.6(0.2-1.8) |
低凝组 | 16 | 12.9(6.0-21.0) | 6.1(2.8-9.1) | 17.5(1.0-139.5) | 1.2(0.2-2.8) |
Z值 | -1.101 | -42.163 | -0.715 | -0.433 | |
P值 | 0.271 | 0.031 | 0.474 | 0.678 |
低凝组较高凝组D1Cr、BUN、ALT升高(P<0.05),两组间PaO2/FiO2、TBiL、ALB、Lac差异无统计学意义,见表5。
分组 | 例数 | Cr(μmol/L) | BUN(μmol/L) | ALT(U/L) |
---|---|---|---|---|
高凝组 | 26 | 21.5(12.7-28.8) | 2.4(1.3-28.8) | 28.0(22.8-47.3) |
低凝组 | 16 | 39.0(20.0-70.8) | 5.0(2.7-10.3) | 150.0(38.0-345.0) |
Z值 | -2.373 | -2.695 | -3.439 | |
P值 | 0.018 | 0.007 | <0.001 |
低凝组D1P-MODS、D1~3器官障碍累积数目高于高凝组(P<0.05),见表6。
项目 | 高凝组(n=26) | 低凝组(n=16) | Z值 | P值 |
---|---|---|---|---|
P-MODS(D1) | 1.5(1.0-3.3) | 6.0(4.0-8.0) | -3.484 | 0.001 |
器官障碍累积数目 | ||||
D1 | 1.0(0-1.5) | 4.5(2.0-5.0) | -3.75 | <0.001 |
D2 | 1.0(0-1.0) | 3.5(2.0-5.0) | -3.303 | 0.001 |
D3 | 1.0(0-1.0) | 3.0(2.0-5.0) | -2.739 | 0.006 |
62例脓毒症患儿中,28 d死亡18例,其中低凝组死亡10例(62.5%),高凝组死亡4例(15.4%)。低凝组病死率高于高凝组(χ2=9.894,P=0.002)。
死亡组较存活组D1~3TEG结果呈持续低凝状态:D1~2R及D1、D3K延长,D1~3α减小,D1~3MA、CI降低(P<0.05),见表7。
存活组(n=44) | 死亡组(n=18) | Z值 | P值 | ||
---|---|---|---|---|---|
R(min) | |||||
D1 | 4.1(3.2-5.4) | 7.6(3.8-10.8) | -2.555 | 0.011 | |
D2 | 3.8(2.9-4.9) | 5.9(4.3-9.5) | -3.200 | 0.001 | |
D3 | 3.9(3.5-5.1) | 6(3.9-8.1) | 0.061 | 0.064 | |
K(min) | |||||
D1 | 1.1(0.9-1.8) | 1.8(1.2-5.8) | -2.962 | 0.003 | |
D2 | 1.2(0.8-1.9) | 1.5(1.0-3.2) | 0.073 | 0.077 | |
D3 | 3.9(3.5-5.1) | 2.1(1.3-3.8) | 0.031 | 0.029 | |
α(°) | |||||
D1 | 74.4(67.7-77.1) | 57.7(25.9-69.2) | -3.594 | <0.001 | |
D2 | 71.2(63.9-77.0) | 62.3(42.2-75.4) | -2.050 | 0.04 | |
D3 | 72.5(67.1-77.4) | 65.1(49.1-72.5) | -2.046 | 0.041 | |
MA(mm) | |||||
D1 | 66.7(54.5-72.4) | 46(29.2-65.7) | -3.463 | 0.001 | |
D2 | 64.5(55.9-68.9) | 53.8(40.2-56.4) | -3.355 | 0.001 | |
D3 | 64.1(56.1-70.2) | 50.2(46.3-60.4) | -2.698 | 0.007 | |
CI | |||||
D1 | 3.2(0.3-3.6) | -1.4(-6.4-3.6) | -2.194 | 0.004 | |
D2 | 2.5(-0.6-3.6) | -1.0(-3.0-1.9) | -2.784 | 0.004 | |
D3 | 2.0(0.6-3.8) | -0.9(-4.1-0.9) | -2.722 | 0.005 |
Log Rank法比较低凝组、高凝组、凝血正常组28 d生存曲线分布差异有统计学意义(χ2=6.852,P=0.009)(图1)。D1APTT>45 s、28~45 s与<28 s患儿28 d生存曲线分布差异无统计学意义(χ2=2.798,P=0.094);D1 PT>14 s与9~14 s患儿28 d生存曲线分布差异无统计学意义(χ2=0.051,P=0.528)。
脓毒症病理生理基础是血管内皮细胞(endothelial cell,EC)损伤,EC表面含有肝素类似物蛋白多糖、抗凝血酶、血栓调节素、组织因子途径抑制物、内皮细胞蛋白C受体等多种抗凝物质,使生理流动的血液处于轻度的抗凝状态,EC还具有调节促炎和抗炎反应、调节免疫细胞及维持屏障作用的功能[11]。当脓毒症EC损伤后,炎症反应和凝血紊乱相互作用,形成炎症-凝血网络,其通过炎症反应及血栓形成加重脓毒症。炎症因子肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1可促进单核细胞、内皮细胞分泌组织因子,内毒素和细胞因子可以抑制内皮细胞分泌具有抗凝作用的血栓调节素,并可以诱导过度生成纤溶酶原激活抑制剂抑制纤溶作用。近年来研究发现脓毒症时坏死或凋亡细胞释放的细胞内蛋白质如高迁移率族蛋白1和组蛋白在炎症反应和凝血紊乱中也起到调控作用[12,13,14,15,16]。失控的炎症反应和凝血功能过度激活加速凝血因子消耗,最终进展为低凝状态。
本研究结果显示严重脓毒症患儿较脓毒症患儿D1~3TEG检测呈持续低凝状态;低凝组D1PRISM Ⅲ高于高凝组。低凝组患儿疾病危重程度高于高凝组,符合脓毒症凝血紊乱的病理生理进展规律。D3R和D2K在两组间差异无统计学意义,可能与入PICU后输注凝血因子及Fib治疗有关。低凝组D1中性粒细胞绝对计数低于高凝组,可能为重症感染引起过度全身炎症反应、白细胞破坏所致。
持续高凝状态可导致血管内纤维蛋白沉积和微血栓形成,加重组织脏器缺血缺氧和毛细血管渗漏,是脓毒症并发MODS的病理生理基础[17,18]。伴随组织缺氧和器官功能障碍加剧,凝血因子大量消耗,高凝状态转变为消耗性低凝状态,并最终演变为显性弥散性血管内凝血(DIC),DIC也是加剧MODS的因素之一。本研究结果显示低凝组较高凝组器官功能指标恶化,说明伴随凝血功能恶化,MODS亦加剧。Daudel等[19]报道30例成人脓毒症患者,高序贯器官功能衰竭评分(SOFA)组(>10分)较低SOFA组(≤10分)呈低凝状态。Ostrowski等[20]根据TEG将脓毒症患者分为高凝组、低凝组和正常组,低凝组连续5 d SOFA评分高于高凝组(均P<0.05)。文献报道的结果支持TEG呈低凝状态较高凝状态患者的MODS更为严重,本研究与文献报道结果一致。
本研究中死亡组D1~3TEG较存活组呈持续低凝状态。而低凝组的病死率高于高凝组。Adamzik等[21]报道98例脓毒症患者中,死亡组较存活组呈低凝状态,所有指标正常患者30 d存活率为85.7%;单个指标异常患者30 d存活率降至58.7%。Ostrowski等[20]报道50例严重脓毒症患者,根据MA值分为高凝组、低凝组和正常组,低凝组28 d病死率高于正常组(55% vs.13%,P<0.05),D1低凝状态是严重脓毒症28 d死亡的危险因素(OR 4.29,95%CI 1.35~13.65,P=0.014)。文献报道与本研究结果说明随着凝血紊乱由高凝转变为低凝,MODS严重程度加重,脓毒症的病死率增加,TEG结果可揭示凝血紊乱的程度与脓毒症预后之间的关联。
进一步采用Kaplan-Meier生存曲线分析显示,D1低凝组、高凝组和正常组28 d生存曲线分布存在统计学差异,而D1PT/APTT正常和异常患儿生存曲线分布无统计学差异,说明TEG的CI指标对于脓毒症28 d预后具有提示作用,而CCTs的PT/APTT检测无法提示脓毒症预后。这与Adamzik等[21]采用ROTEM预测脓毒症30 d预后的研究结果相似。提示TEG对预测脓毒症预后具有一定的作用。
综上所述,儿童脓毒症通过EC损伤激活外源性凝血途径,导致凝血因子和血小板大量消耗,继而引发凝血紊乱,甚至DIC,加重脓毒症MODS和增加病死率。TEG可以从整体反映患儿的凝血状况,其不仅是脓毒症凝血紊乱良好的检测方法,对于综合判断脓毒症严重度、MODS程度和预测脓毒症预后具有一定意义。