生物技术
腺相关病毒-乙型肝炎病毒小鼠模型的建立
中华生物医学工程杂志, 2017,23(4) : 279-282. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2017.04.004
摘要
目的

建立一种有效的HBV感染小鼠模型。

方法

采用三质粒共转染HEK293细胞生产腺相关病毒-乙型肝炎病毒(AAV-HBV)病毒,反复冻融后密度梯度离心法纯化病毒并进行鉴定。健康成年C57BL/B6小鼠20只按随机数字法分为实验组(n=10)和对照组(n=10),实验组小鼠尾静脉注射AAV-HBV病毒,对照组小鼠注射同等剂量的AAV-GFP病毒。观察两组小鼠一般情况,不同时间点采血检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用荧光定量PCR法、化学发光法分别进行血清HBV DNA和HBsAg定量检测。处死小鼠后获取肝脏进行病理检查,免疫组织化学法检测肝脏组织HBsAg、HBcAg表达。

结果

成功获得纯化的AAV-HBV病毒,病毒纯度大于97%。AAV-HBV病毒感染小鼠一般情况良好,无异常表现,且肝功能正常。光镜下观察肝脏组织未见明显病理损伤表现,免疫组织化学检测显示肝细胞质可见HBsAg阳性表达、细胞核可见HBcAg阳性表达。AAV-HBV病毒感染小鼠血液中可稳定检测到HBV DNA和HBsAg表达。

结论

成功构建了一种接近人类的,可有效、持续产生病毒的HBV感染小鼠模型。

引用本文: 应若素, 牛易, 林路平, 等.  腺相关病毒-乙型肝炎病毒小鼠模型的建立 [J] . 中华生物医学工程杂志, 2017, 23(4) : 279-282. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2017.04.004.
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慢性乙型病毒性肝炎和乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的肝脏疾病(如肝纤维化、肝硬化、肝癌等)是全球公共卫生面临的重大挑战,目前全世界仍有约2.4亿慢性HBV感染者[1,2]。我国HBV流行情况相当严重,目前约有9 700万HBV携带者,约占中国总人口7.18%,其中至少有2 000万是活动性HBV感染者[3,4]。近年来非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者逐渐增多,我国发达地区NAFLD患病率已高达15.35%[5],导致慢性乙型病毒性肝炎合并NAFLD患者持续增多,慢性乙型病毒性肝炎合并NAFLD的治疗已成为HBV研究中的新问题,而HBV感染合并NAFLD动物模型逐渐成为研究的热点。已有研究使用HBV转基因小鼠建立HBV感染合并NAFLD小鼠模型[6,7],但尚未检索到在上述模型小鼠上进行药物研究的报道,可能构建的HBV感染合并NAFLD模型小鼠不适于药物试验。本研究拟构建有效的HBV感染小鼠模型,进而为构建HBV感染合并NAFLD小鼠模型提供依据。

 
 
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