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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)是嗜肝病毒持续感染和HBV复制的突出标志，也是评价HBV感染状态及治疗效果最客观、敏感的指标[1]。监测肝脏内HBV cccDNA的含量对于病情判断、疗效和预后评估均具有重要意义。本研究通过检测拉米夫定初治后患者肝组织内HBV cccDNA的含量及血清HBsAg、HBeAg、HBV DNA等水平，探讨肝组织内HBV cccDNA的含量与HBV血清学标志物和病毒载量的相关性。
选取2010年2月至2012年3月浙江中医药大学附属第二医院肝病科门诊及住院治疗的20例HBeAg阳性CHB患者，其中男性11例，女性9例，年龄23～62岁，平均(44±11)岁。所选病例符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》的诊断标准[2]，并排除肝硬化失代偿期患者。所有患者6个月内未接受抗病毒治疗或免疫调节治疗，同时排除合并其他病毒感染，排除脂肪性、遗传代谢性及肿瘤性自身免疫相关的其他疾病。
所有患者予拉米夫定(葛兰素史克公司生产，100 mg/次，1次/d)治疗48周后，抽取静脉血5 mL，冰箱低温保存。抽血当天经肝组织穿刺活检针(MC1616，巴德医疗器械(上海)有限公司)，取肝组织2块，每块肝穿组织长度不少于15 mm，置福尔马林液体中，后置－80℃冰箱保存。
HBsAg和HBeAg定量采用雅培Ci8200免疫分析仪行检测。HBV DNA采用实时荧光定量PCR(RT－PCR)法检测，试剂盒由罗氏公司提供。
采用IQ－PCR技术，试剂盒购于杭州博塞基因诊断技术有限公司，操作按说明书进行，单位为"拷贝/细胞"。采用罗氏公司LightCycler定量PCR仪，取检测结果对数值进行统计学分析。
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据处理，计量资料用
±s表示，两组数据之间的关系采用Pearson相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。
20例CHB患者经拉米夫定初治48周后，血清HBsAg定量为(127±52)U/mL, HBeAg定量为(13±8)S/CO, HBV DNA载量为(3.3±1.3)lg拷贝/mL，肝组织HBV cccDNA定量为(17±12)拷贝/细胞。
20例CHB患者肝组织HBV cccDNA与血清HBsAg呈正相关(r＝0.887，P<0.05)，见图1。
20例CHB患者肝组织HBV cccDNA与血清HBeAg呈正相关(r＝0.891, P<0.05)，见图2。
20例CHB患者肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA呈正相关(r＝0.944, P<0.05)，见图3。
前期研究结果表明，HBV cccDNA的存在与CHB的发展密切相关，而肝组织中HBV cccDNA含量与血清HBV DNA、HBsAg和HBeAg载量均呈正相关，因此，HBV血清学标志物和血清HBV DNA载量在预测肝组织病理损伤中有重要意义[3]。本研究结果显示，20例患者经拉米夫定治疗48周后，肝组织中HBV cccDNA含量与血清HBV DNA、HBsAg和HBeAg载量均呈正相关，其中以与血清HBV DNA的相关性最高(r＝0.944)，这与之前部分研究结论一致[4,5]，提示对治疗后患者仍可用血清HBV DNA载量和HBsAg、HBeAg水平来评估临床抗病毒疗效。
另一方面，核苷(酸)类药物对HBV复制的关键中间体HBV cccDNA无直接的抑制作用，尚不能清除肝组织内HBV cccDNA，过早或盲目停药，甚至HBeAg血清学转换和血清HBV DNA降至检测限以下停药，HBV仍有再次复制的可能。据文献报道，在进行抗病毒治疗的CHB患者中，一些患者血清HBV DNA降至检测限以下，肝组织中仍可检测到HBV cccDNA[6]，血清中HBV DNA的抑制并不能说明肝细胞内HBV被清除。在本研究中，有7例血清HBV DNA定量低于检测水平，但肝组织HBV cccDNA却仍维持一定水平。因此，肝组织内HBV cccDNA水平仍是评估抗病毒药物疗效及判断临床治愈的金标准。由于口服核苷酸抗病毒药物对肝组织内HBV cccDNA的清除作用有限[7]，研究肝细胞HBV cccDNA维持及清除的机制是目前迫切需要解决的问题，在尚无有效清除肝细胞内HBV cccDNA的治疗前，应重视抗病毒结合免疫调节治疗方案。
