运用Cre/loxP系统来定位腺苷A2A受体（A2AR）在小鼠视网膜上的分布情况。
实验研究。将雄性B6.FVB（Cg）-Tg（Adora2a-cre）KG139Gsat/Mmucd（简称A2A-cre）小鼠与雌性B6．129S6-Gt（ROSA）26Sortm9（CAG-tdTomato）Hze/J（简称Ai9）小鼠交配，对新生小鼠基因型进行鉴定，并选取5只4周龄A2A-cre+，Ai9鼠，此小鼠表达的Cre酶能敲除Ai9小鼠中的STOP序列使Tomato荧光蛋白表达。采用免疫荧光方法分别将Tomato红色荧光蛋白与不同类型的视网膜细胞抗体共标记，通过观察Tomato红色荧光蛋白和视网膜细胞特异性抗体的共定位结果，来明确A2AR在视网膜上的定位情况。
免疫荧光结果显示Tomato+细胞主要分布在视网膜神经节细胞层和内核层，外核层并没有发现。其中神经节细胞层中的Tomato+细胞少数为神经节细胞，多数为异位无长突细胞，而分布于内核层的Tomato+细胞主要为Müller细胞和无长突细胞。进一步对无长突细胞亚型分析发现，Tomato+无长突细胞多数为AⅡ型无长突细胞，而胆碱能无长突细胞和多巴胺能无长突细胞并无Tomato+表达。
在4周龄A2A-cre+，Ai9小鼠视网膜中，A2AR主要表达于神经节细胞、无长突细胞和Müller细胞中。
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腺苷A2A受体（Adenosine A2A receptor，A2AR）是4种腺苷受体（A1、A2A、A2B和A3）其中之一[1,2]，其与Gs蛋白偶联，在葡萄膜黑色素瘤、青光眼、早产儿视网膜病变和近视等视网膜相关疾病中具有重要的调控作用[3,4,5,6,7,8]。因此，明确A2AR在何种视网膜细胞上表达是研究A2AR调控相关疾病分子机制的重要条件。以往对A2AR在视网膜上的定位主要基于早期放射自显影，原位杂交和免疫组织化学技术[9,10,11,12]。由于上述方法存在非特异性等局限性问题导致定位结果不是很一致。为此需要一种更特异性的方法来确定A2AR在视网膜上的定位。Cre/loxP重组酶系统中Cre重组酶能够特异性地敲除loxP位点之间的DNA[13]。利用此特性，将A2A基因启动子驱动的Cre重组酶的小鼠与另一种荧光报告基因小鼠（在强启动子和Tomato基因之间有一个两端带有loxP位点的STOP序列，正常情况下STOP序列阻止Tomato荧光标记蛋白的表达）。当2种转基因小鼠交配后，就能够得到一种既带有cre基因又带有Tomato荧光报告基因小鼠，只有表达A2A基因的细胞才能驱动Cre重组酶的表达，此Cre酶进而能够敲除STOP序列使Tomato荧光蛋白表达，从而可以间接定位A2A基因在细胞上的表达情况。本研究将利用上述Cre/loxP系统的特性并结合免疫荧光的方法来定位A2AR在小鼠视网膜细胞上的分布情况，以期为A2AR在视网膜相关疾病中的分子机制研究提供依据。
