实验研究
聚己内酯/明胶纳米纤维膜在组织工程化视网膜色素上皮构建中的应用
中华实验眼科杂志, 2019,37(11) : 884-887. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.11.007
摘要
目的

探索聚己内酯/明胶纳米纤维复合膜在构建组织工程化视网膜色素上皮(RPE)中的应用前景。

方法

采用自发分化法将人胚胎干细胞(ESC)诱导为视网膜色素上皮(ESC-RPE)细胞,并通过流式细胞术检测ESC-RPE细胞特定细胞标志物的表达情况;采用静电纺丝法制备聚己内酯(PCL)纳米纤维膜和PCL/明胶纳米纤维复合膜,扫描电子显微镜下观察2种纳米纤维膜的表面形貌,并测定2种支架的接触角;利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测2种纳米纤维膜浸提液对ESC-RPE细胞活力的影响;将ESC-RPE细胞培养在PCL/明胶纳米纤维复合膜上,通过免疫荧光法检测组织工程化RPE特异性标志物的表达。

结果

ESC-RPE细胞不表达多能性标志物OCT4,阳性表达RPE特异性标志物小眼畸形相关转录因子(MITF)、RPE65和Bestrophin。PCL纳米纤维膜和PCL/明胶纳米纤维复合膜均呈纤维多孔状,2种支架的接触角分别为(97.2±3.1)°和(13.6±2.4)°,2种支架的浸提液对ESC-RPE细胞的生长均无显著影响。培养在PCL/明胶纳米纤维复合膜上的ESC-RPE细胞阳性表达特异性标志物MITF和ZO-1。

结论

PCL/明胶纳米纤维复合膜具有良好的亲水性和生物相容性,并且可支持ESC-RPE细胞的生长,有望应用于组织工程化RPE的构建。

引用本文: 唐甜, 陈洁, 邓华, 等.  聚己内酯/明胶纳米纤维膜在组织工程化视网膜色素上皮构建中的应用 [J] . 中华实验眼科杂志, 2019, 37(11) : 884-887. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.11.007.
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视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)功能障碍将导致年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)等视网膜变性疾病,这类疾病目前尚缺乏有效治疗措施。组织工程化RPE移植有望缓解视网膜变性的进展,为视网膜变性疾病的治疗带来了希望[1,2]。组织工程化RPE移植是指将RPE细胞体外培养在生物材料上,形成有极性、有功能的单层RPE细胞片,再将生物材料与RPE细胞片的复合体移植到视网膜下腔[3]。胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)可诱导为与体内结构、功能相似的RPE细胞,为组织工程化RPE移植提供了稳定的种子细胞来源[4]。但如何选择恰当的生物材料成为研究的热点。目前,最新的临床试验中采用了聚酯膜和Paralene薄膜用于构建组织工程化RPE,但这2种高分子材料均不可降解,在人体内存在安全隐患[1,2]。聚己内酯(polycaprolactone,PCL)是美国食品药品管理局批准可用于人体的可降解材料,但其亲水性较差,不利于细胞生长。明胶是一种天然、可降解的高分子材料,具有良好的生物相容性和极佳的亲水性,常用作包被剂,以促进细胞贴壁和生长等。因此,本研究中通过静电纺丝技术制备了PCL/明胶纳米纤维复合膜,以ESC来源的RPE细胞(ESC-RPE细胞)为种子细胞,探索PCL/明胶纳米纤维膜用于构建组织工程化RPE的应用前景。

 
 
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