观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)抑制剂对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。
将APRE-19细胞分为Avastin干预组和VAS2870干预组，并按照药物剂量不同将Avastin干预组亚分为常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组，将VAS2870干预组亚分为1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组，缺氧对照组采用终浓度为300 μmol/L CoCl2处理ARPE-19细胞以建立细胞化学缺氧模型。采用细胞免疫荧光染色技术对不同干预组细胞中NOX4和VEGF表达进行测定和定位，采用Western blot法对不同干预组细胞中NOX4和VEGF蛋白相对表达量进行测定和比较。
Western blot法检测显示，常氧对照组、缺氧对照组及0.25 mg/ml、0.50 mg/ml和0.75 mg/ml Avastin干预组NOX4蛋白相对表达量分别为0.657±0.153、1.000±0.200、1.206±0.300、1.260±0.200和1.413±0.273，VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.821±0.110、1.210±0.100、0.672±0.100、0.340±0.120和0.300±0.130，组间总体比较差异均有统计学意义(F＝17.631，P<0.001；F＝4.777，P＝0.020)，其中0.75 mg/ml Avastin干预组细胞中NOX4蛋白表达量明显高于常氧对照组，差异有统计学意义(P<0.001)，0.25、0.50和0.75 mg/ml Avastin干预组VEGF-A表达量均明显低于缺氧对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。常氧对照组、缺氧对照组及1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4的蛋白相对表达量分别为0.970＋0.120、1.060＋0.130、0.880＋0.130、0.567＋0.135和0.450＋0.120，VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.387＋0.135、0.627＋0.125、0.370＋0.140、0.363＋0.140和0.160＋0.100，组间总体比较差异均有统计学意义(F＝12.933，P<0.001；F＝4.948，P<0.05)，其中3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中NOX4蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组，差异均有统计学意义(均P<0.001)；1 μmol/ml、3 μmol/ml和5 μmol/ml VAS2870干预组细胞中VEGF-A蛋白相对表达量明显低于缺氧对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
NOX4抑制剂可抑制人RPE细胞中VEGF-A表达。
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脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)、病理性近视(pathological myopia，PM)的共同致病机制。研究发现，抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)药物治疗可用于眼部新生血管的治疗，但仍有约30%的患者疗效欠佳[1,2]，若治疗不当则会导致视网膜机化膜收缩，加重缺血，或可造成牵拉性视网膜裂孔[3,4]。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4，NOX4)基因最初在肾脏内被发现，作为一种非巨噬细胞型NOX表达于血管内皮和血管平滑肌等多种细胞内，是血管系统活性氧(reactive oxygenspecies，ROS)的主要来源[5,6,7]。缺氧情况下ROS的过量释放可导致血管内皮细胞功能障碍和凋亡，从而加重缺血程度，诱导血管生成[8]，VEGF是缺氧诱导的新生血管生成的主要促进因子，有研究证实，在rd小鼠视网膜感光细胞变性过程中NADPH氧化酶生成ROS的活化反应明显增强，NADPH氧化酶抑制剂香荚兰乙酮能够延缓rd小鼠感光细胞的凋亡过程[9]。缺氧可诱导视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞中NOX4高表达，NOX4高表达可能与VEGF促进新生血管有关，推测下调NOX4表达可抑制缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞中VEGF表达，进而抑制新生血管生成，但相关假设有待验证。VAS2870为NOX4抑制剂，本研究拟明确NOX4抑制剂对VEGF促血管新生的抑制作用。
