探讨DKK1(Dickkopf1)通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增生的影响及其可能的作用机制，为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新靶点。
将人LECs系(SRA 01/04细胞)分为Wnt3a过表达组、DKK1组和对照组。Wnt3a过表达组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞构建PCO模型。DKK1组转染Wnt3a cDNA表达载体后48 h在培养基中加入100 μg/ml DKK1进行干预，对照组细胞转染pcDNA3-HA表达载体。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞生存率；采用免疫细胞化学法检测各组细胞增生细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达；采用Western blot法检各组细胞中Wnt3a、CyclinD1和C-Myc蛋白的表达；采用免疫荧光技术法检测并定位各组细胞中β-catenin的表达。
Western blot检测发现，Wnt3a过表达组Wnt3a蛋白的相对表达量为0.84±0.06，高于对照组的0.49±0.07，差异有统计学意义(t＝3.704，P<0.05)。CCK-8试验显示，不同时间点各组细胞生存率总体比较差异均有统计学意义(F分组＝10.910，P<0.05；F时间＝6.041，P<0.05)，其中Wnt3a过表达组细胞生存率明显高于对照组，DKK1组细胞生存率明显低于Wnt3a过表达组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、Wnt3a过表达组和DKK1组细胞中PCNA阳性表达率分别为(9.4±1.4)%、(43.4±5.4)%和(14.2±2.3)%，总体比较差异有统计学意义(F＝28.250，P<0.05)，其中DKK1组和对照组细胞中PCNA阳性表达率均低于Wnt3a过表达组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫荧光技术检测发现，Wnt3a过表达组β-catenin蛋白主要表达于细胞质和细胞核，对照组β-catenin蛋白仅分布于细胞质，DKK1组β-catenin蛋白分布于细胞质，少量分布于细胞核。Western blot法检测显示，对照组、Wnt3a过表达组和DKK1组C-Myc相对表达量分别为0.59±0.05、0.93±0.02和0.47±0.08，CyclinD1的相对表达量分别为0.64±0.07、0.84±0.03和0.55±0.10，总体比较差异均有统计学意义(F＝20.580、5.040，均P<0.05)；其中Wnt3a过表达组C-Myc和CyclinD1相对表达量高于对照组和DKK1组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
DKK1抑制SRA01/04细胞中Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化，下游靶蛋白CyclinD1和C-Myc表达下调，可能是DKK1抑制人LECs增生的生物学机制。
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晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification，PCO)是白内障囊外摘出术后常见的并发症，术后残余晶状体前囊膜和赤道部晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)异常增生，通过上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)发生迁移和转化，与细胞外基质聚积在晶状体囊袋形成纤维斑块，发生后发性白内障，导致视力下降[1]，因此LECs增生和EMT的分子调控机制在PCO的形成中发挥重要作用，是PCO治疗的靶点。在PCO发生和发展中，转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)、Wnt、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)和纤维母细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)等生物学信号通路的异常活化和相互作用可调控LECs的纤维化进程。经典Wnt通路，即Wnt/β-catenin通路的异常活化能够诱导人LECs异常增生，发生EMT[2]。Wnt3a蛋白与细胞膜的受体卷曲蛋白和低密度脂蛋白受体相关蛋白复合体LRP5/6结合后激活G蛋白蓬乱蛋白，抑制糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)对β-catenin的磷酸化，促进β-catenin的核转移，与核转录因子Tcf/Lef结合，激活下游靶基因启动基因转录[3]。前期动物实验发现Wnt拮抗剂DKK(Dickkopf)分泌蛋白家族成员DKK1能有效抑制PCO形成，抑制LECs发生EMT[4]。目前，DKK1对LECs增生的作用及其机制尚不清楚。本研究探讨DKK1对LECs增生的影响及其可能的调控机制，为今后PCO的防治提供实验依据。
