实验研究
不同体细胞来源人诱导多能干细胞向视网膜类器官分化能力的评价
中华实验眼科杂志, 2020,38(10) : 821-827. DOI: 10.3760/cma.j.cn115989-20200805-00563
摘要
目的

评价不同体细胞来源的人诱导多能干细胞(hiPSCs)向3D视网膜类器官分化的能力。

方法

采用血液细胞重编程获得的hiPSCs系绿色荧光蛋白(GFP)标记的BC1细胞(BC1-GFP)及Gibco、尿液细胞重编程获得的hiPSCs系UE017进行视网膜诱导分化。光学显微镜下记录视网膜形态的发生和发展过程,采用免疫荧光染色法检测获得的视网膜中各种细胞亚类的特异性分子标志物表达情况,对不同细胞系分化视网膜的效率进行分析和比较。

结果

血液和尿液细胞来源的hiPSCs均可成功诱导分化为3D视网膜类器官,包括神经视网膜和视网膜色素上皮细胞。视网膜类器官能够模拟体内视网膜的发育过程,逐渐分化出所有神经视网膜亚类细胞,包括视网膜神经节细胞、光感受器细胞、无长突细胞、水平细胞、双极细胞和Müller细胞,甚至形成板层状结构。2种体细胞来源的hiPSCs在分化为视网膜类器官的效率上存在差异,血液来源的细胞比尿液来源的细胞分化为视网膜类器官的效率更高。

结论

血液和尿液体细胞来源的hiPSCs均可诱导出3D视网膜类器官,获得的视网膜类器官中包括所有视网膜细胞亚类,但2种体细胞来源的hiPSCs分化成视网膜类器官的效率不同。

引用本文: 谢冰冰, 关远远, 高冠杰, 等.  不同体细胞来源人诱导多能干细胞向视网膜类器官分化能力的评价 [J] . 中华实验眼科杂志, 2020, 38(10) : 821-827. DOI: 10.3760/cma.j.cn115989-20200805-00563.
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视网膜退行性疾病,如视网膜色素变性、年龄相关性黄斑变性是导致人视力丧失的主要原因,其病理机制是光感受器细胞、视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的变性丢失,进而在疾病晚期造成其他类型的视网膜细胞凋亡。由于这些细胞损伤后无法再生,因此迄今为止视网膜退行性疾病尚无有效的治疗方法[1,2,3]。人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)是将终末分化的体细胞经过外源强制表达重编程基因,如OCT4SOX2KLF4c-MYC转化获得的一类具有自我复制和多向分化潜能的细胞,类似胚胎干细胞[4]。研究表明,在特定培养条件下,hiPSCs可在体外诱导分化出几乎所有类型的细胞,如心肌细胞、神经细胞、造血干细胞和视网膜细胞[5,6,7,8,9,10]。目前几乎所有体细胞都可通过基因重编程技术转化为hiPSCs,包括成纤维细胞、外周血细胞、脐带血细胞、间充质干细胞、牙髓细胞,甚至尿液细胞[11,12,13,14],然而,并非所有的hiPSCs在体外分化成目标细胞的能力都相同[15]。不同组织体细胞来源的hiPSCs,甚至同一组织的体细胞来源的不同克隆hiPSCs在分化潜力上也存在差异。本研究团队一直致力于hiPSCs向视网膜类器官分化的研究,并发现不同细胞系在分化为视网膜类器官方面存在一定的差异。了解不同体细胞来源hiPSCs向视网膜类器官的分化能力成为相关研究的关键环节之一。本研究拟对不同体细胞来源的hiPSCs向视网膜类器官分化的能力进行评估,为相关领域的基础及临床研究提供依据。

 
 
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