探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lncRNA ADPGK-AS1)对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响及其调控机制。
收集2017年2月至2018年11月在驻马店市中心医院和郑州大学第一附属医院接受RB手术治疗的RB患者39例39眼的术中瘤旁组织和瘤体组织标本，采用实时荧光定量PCR法检测ADPGK-AS1和miR-623在标本组织中的相对表达量。体外培养人RB细胞Y-79，将培养细胞分为小干扰RNA正常对照组(siRNA-NC组)、siRNA-ADPGK-AS1组、微小RNA正常对照组(miR-NC组)、miR-623组、siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组和siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组，采用MTT法检测各组细胞增生率；采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭数；采用双荧光素酶报告实验检测Y-79细胞中ADPGK-AS1和miR-623的靶向关系；采用Western blot法检测不同干预组细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达量。
与瘤旁组织比较，RB组织中ADPGK-AS1相对表达量升高，miR-623相对表达量明显降低，差异均有统计学意义(t＝40.522、48.497，均P<0.01)；与siRNA-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1组细胞中Ki-67蛋白相对表达量明显下降，Y-79细胞增生A值显著降低，差异均有统计学意义(t＝26.833、18.522，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.123、26.183，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组迁移细胞数和侵袭细胞数均明显少于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝12.385、19.201，均P<0.01)；双荧光素酶报告实验证实ADPGK-AS1可靶向结合miR-623；miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量明显低于miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.137、22.200、21.094，均P<0.01)；与miR-NC组比较，miR-623组Y-79细胞增生A值显著降低且迁移细胞数和侵袭细胞数均明显减少，差异均有统计学意义(t＝16.398、11.400、17.846，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显高于siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝20.795、17.493、23.479，均P<0.01)；与siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组增生A值明显升高且迁移细胞数及侵袭细胞数明显增多，差异均有统计学意义(t＝15.600、14.495、17.855，均P<0.01)。
敲低ADPGK-AS1基因可抑制RB细胞增生、迁移和侵袭，其作用机制与miR-623的表达上调有关。
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视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是临床上常见的眼内原发性恶性肿瘤，严重威胁患者生命，早期发现并及时治疗可提高患者生存率。RB的发病机制尚未完全阐明，但研究发现长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)、微小RNA(microRNA，miRNA)表达变化与RB的发生和发展密切相关，如miR-25-3p和miR-494通过调控PI3K/AKT信号通路促进RB的进展[1,2]，miR-144可作为RB诊断的标志物[3]，miR-129-5p、miR-936和miR-598通过减弱PI3K/Akt通路的作用来抑制RB细胞的生物学行为[4,5,6]，沉默lncRNA ANRIL可通过调控miR-99a来抑制RB细胞增生[7]，miR-184可增强RB对化学疗法的敏感性[8]，miR-214-3p通过靶向ABCB1和XIAP来调控RB细胞凋亡[9]，此外miR-188-5p、miR-218-5p和miR-218-5p也参与RB细胞的凋亡过程[10,11,12]。lncRNA在RB中表达异常，可能参与细胞增生、迁移等生物学行为变化过程。研究表明，在RB中lnc00152、lncRNA MALAT1和lncRNA TP73-AS1表达上调，可促进细胞增生、迁移及侵袭[13,14,15]。lncRNA ADPGK-AS1在胰腺癌组织中的表达水平升高，并通过激活锌指E-盒结合同源异形盒-1促进胰腺癌进展[16]。靶基因预测显示，二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(adenosine diphosphate-dependent glucokinase antisense RNA 1，ADPGK-AS1)与miR-623存在结合位点，miR-623在胰腺癌中表达水平降低，并可通过抑制基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1，MMP1)的表达而抑制胰腺癌细胞的转移[17]，推测ADPGK-AS1与miR-623的结合对RB也可发挥类似的作用，但其具体分子机制尚未阐明。本研究探讨ADPGK-AS1对RB细胞生物学行为的调控作用及其机制，以期为RB的治疗提供新的靶点。
