探讨小干扰RNA-Yes相关蛋白1(siRNA-YAP1)对转化生长因子β2(TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。
将人LECs株HLEB-3细胞分为对照组和TGF-β2诱导组，正常对照组采用无血清低糖培养基处理细胞，TGF-β2诱导组采用10 ng/ml TGF-β2处理细胞，分别培养24 h。另将HLEB-3细胞分为siRNA空载体组、siRNA-YAP1转染组、siRNA空载体+TGF-β2组和siRNA-YAP1+TGF-β2组，分别采用含有siRNA空载体和siRNA-YAP1序列的质粒转染细胞。采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞中转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)mRNA及其蛋白的相对表达量；采用细胞免疫荧光、Western blot法检测各组中LECs EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在细胞中的表达变化。
TGF-β2诱导组中E-cadherin蛋白相对表达量为0.830±0.104，低于正常对照组的1.180±0.118，TGF-β2诱导组中Vimentin蛋白相对表达量为1.240±0.110，高于正常对照组的0.797±0.110，差异均有统计学意义(t＝3.857，P＝0.018；t＝-4.933，P＝0.008)；TGF-β2诱导组YAP1 mRNA和蛋白的相对表达量分别为2.200±0.193和1.203±0.121，显著高于正常对照组的1.136±0.123和0.967±0.025，差异均有统计学意义(t＝-9.288，P<0.01；t＝-3.329，P＝0.029)。与siRNA空载体组比较，siRNA-YAP1转染组细胞中YAP1 mRNA及蛋白相对表达量明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)。与siRNA空载体+TGF-β2组比较，siRNA-YAP1+TGF-β2组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量明显升高，Vimentin蛋白相对表达量明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
YAP1参与TGF-β2诱导的HLEB-3细胞EMT过程，siRNA-YAP1抑制TGF-β2诱导的人LECs EMT过程。
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后发性白内障即晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification，PCO)，是白内障术后的主要并发症之一。白内障术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)发生增生、迁移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)及细胞外基质的合成等一系列病理变化，引起正常光滑的后囊膜皱缩形成PCO，导致视力下降。EMT是上皮样细胞向肌成纤维细胞转变的异常分化过程，是PCO发生的关键。转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2，TGF-β2)是诱发纤维化形成的生长因子。TGF-β2通过激活经典Smad信号传导通路、PI3K/Akt通路和其他通路调节LECs的移行、增生和EMT过程，影响PCO的发生，10 ng/ml TGF-β2诱导HLEB-3细胞发生EMT是研究PCO的适当模型。Hippo信号通路在机体发育和疾病中发挥重要作用，参与胚胎眼形成的多个阶段，其调节紊乱可能导致病理组织过度生长和肿瘤的进展。Yes相关蛋白(Yes-associated protein，YAP)是一种转录共激活因子，通过激活靶转录因子(如TEAD家族)，促进细胞增生，抑制细胞凋亡，诱导基因表达、致癌转化和EMT，从而在调控器官大小和组织稳态中发挥重要作用。通过条件性敲除发育小鼠YAP基因的研究证明，Hippo/YAP信号通路参与维持LECs和晶状体纤维的形态。目前RNA干扰技术在PCO防治中已被广泛应用，采取YAP基因沉默的方法是否可以阻断人LECs的EMT过程尚未完全阐明。本研究探讨小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)-YAP1对TGF-β2诱导人LECs EMT的抑制作用，为PCO的预防提供新的思路。
