探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。
将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。
2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F分组＝4.776，P<0.05；F时间＝13.535，P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G0/G1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义(t＝9.971、-5.063，均P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义(t＝-7.245，P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝-23.254、-5.294、6.062，均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝5.521、8.270，均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义(t＝-14.456，P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义(t＝-4.458，P<0.001)。
沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。
版权归中华医学会所有。
未经授权，不得转载、摘编本刊文章，不得使用本刊的版式设计。
除非特别声明，本刊刊出的所有文章不代表中华医学会和本刊编委会的观点。
白内障是世界范围内的主要致盲眼病之一，尽管晶状体超声乳化术已广泛用于临床且术后效果较好，但术后后发性白内障(posterior capsule opacification，PCO)发生率高，可导致视力再次下降[1,2]。白内障术后残留晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)的增生、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是PCO的主要病理机制[3]。人类同源配对盒基因6(homeobox gene paired-box 6，Pax6)对眼球的正常发育至关重要[4]，目前研究认为Pax6是晶状体形成的1个"主宰基因"，脊椎动物晶状体的形成需要大量的细胞外信号通路和基因调控网络，这些信号通路和基因调控网络由Pax6整合和执行[5]。LECs来源于胚胎期晶状体泡前壁细胞，胚胎发育过程中部分LECs增生分化产生次级晶状体纤维细胞，其余LECs覆盖晶状体前表面。本研究团队早期实验亦证实，Pax6在早期发育的晶状体细胞中均有表达，晶状体形成后，Pax6在LECs中的表达保持不变，在晶状体纤维细胞中随纤维细胞的分化成熟表达水平逐渐下降，提示Pax6参与LECs的增生和分化[6,7,8,9]。LECs具有持续自我更新和对外部损伤及氧化损伤的保护能力，是晶状体再生的功能基础。研究表明，Pax6蛋白在LECs和新生晶状体纤维中存在高表达，与正常晶状体发育过程类似，提示Pax6对LECs增生和分化的影响在晶状体损伤后依然存在[10,11]。但Pax6对人LECs的相关生物学行为，尤其是对EMT的调控作用尚未完全阐明。了解Pax6在人LECs增生、迁移及EMT中的作用对PCO的防治具有重要意义。本研究拟探讨沉默Pax6对人LECs生物学行为的影响及其可能机制，以期为PCO的防治研究提供新的靶点。
