论著
猪脱细胞真皮基质对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响
中华损伤与修复杂志(电子版), 2019,14(1) : 26-33. DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-9450.2019.01.006
摘要
目的

探讨猪脱细胞真皮基质(ADM)对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响。

方法

取新鲜猪皮,经脱细胞处理后制成微粒状,灭菌,密封,常温保存,以备后面实验使用。制作18只C57BL/6小鼠背部全层皮肤缺损模型,以脊柱为中线,在左右各制作直径为6 mm的缺损,左右侧分别以纱布和猪ADM覆盖,隔天纱布侧换药,猪ADM侧不做处理,于模型建立第7天,按照所用材料不同分为纱布组与猪ADM组,再按所取部位不同分为纱布窗口组、猪ADM窗口组、纱布创面组、猪ADM创面组、纱布创缘组、猪ADM创缘组,其中9只小鼠组织用于蛋白质印迹法检测,另外9只小鼠组织用于免疫组织化学检测。通过蛋白质印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、β-catenin、转化生长因子-β(TGF-β)、Wnt3a、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1、成纤维细胞生长因子(FGF)2、FGF9、AKT的蛋白表达,免疫组织化学检测Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9的表达。数据比较采用独立样本t检验。

结果

在小鼠模型建立第7天创面中,蛋白质印迹法检测β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM窗口组(0.533±0.058、0.446±0.039、0.972±0.048)高于纱布窗口组(0.401±0.005、0.132±0.022、0.175±0.036),差异均有统计学意义(t=3.996、12.230、23.130,P值均小于0.05)。β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创面组(0.557±0.009、0.626±0.066、0.868±0.102)高于纱布创面组(0.302±0.010、0.109±0.019、0.036±0.009),差异均有统计学意义(t=32.830、13.020、14.130,P值均小于0.05)。Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创缘组(0.419±0.014、0.370±0.069)高于纱布创缘组(0.115±0.020、0.056±0.007),差异均有统计学意义(t=21.460、7.825,P值均小于0.05)。免疫组织化学检测结果显示Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9在猪ADM组中的表达高于纱布组,且阳性细胞主要分布于毛囊细胞周围。

结论

猪ADM在小鼠创面中可能通过上调SDF-1及Wnt3a/β-catenin信号通路的表达而促进毛囊的再生。

引用本文: 杜烨, 冯自波, 李恭驰, 等.  猪脱细胞真皮基质对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响 [J/OL] . 中华损伤与修复杂志(电子版), 2019, 14(1) : 26-33. DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-9450.2019.01.006.
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皮肤大面积缺损的修复始终是临床治疗的一大难题之一,传统的治疗方式主要是采用自体皮片或皮瓣移植,但是这两种方法存在着皮源有限、有创取皮、易导致二次损伤及瘢痕形成等缺点;不仅如此,游离皮片或皮瓣转移对损伤部位的血供及微环境要求较高,对于创面的完全修复有一定难度[1]。随着组织工程学的发展,组织工程真皮替代物已经逐渐成为修复缺损的一种重要途径。笔者的实验团队在一次偶然的实验中发现,在使用了一种进口猪肌腱组织工程产品治疗后,C57小鼠创面出现了明显的伤口愈合并伴有白色毛发生长的现象。这使笔者团队对国产类似的组织工程材料是否具有促进毛发生长的作用产生了好奇。脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)主要取材于异体皮或异种皮,通过化学手段,将易导致免疫排斥反应的细胞成分去除,保留真皮基质。有研究表明,ADM的表面具有多孔的三维结构,这种结构可以显著促进接种细胞的附着、增殖、迁移及分化,另外ADM类似细胞外基质的超微结构还可以为细胞提供附着所需的配体,促进相邻细胞之间的通讯[2]。不仅如此,ADM的某些成分(糖胺聚糖和蛋白聚糖)也可以与生长因子和细胞因子进行结合,从而促进创面的再生[3]。此外,负载在ADM支架上的结缔组织生长因子可以通过激活蛋白激酶C信号通路增强纤连蛋白的表达,明显促进α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达,并增强了创伤部位的血管新生和胶原合成[4]。但到现在为止,有关ADM在创面毛囊再生中的研究较少,且目前无相关明确机制的报道,因此,笔者团队想通过体外实验检测与毛囊再生相关的基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1, SDF-1)、Wnt3a/β-catenin及其他蛋白的表达,以初步探索ADM对小鼠创面毛囊再生中相关蛋白表达的影响,为后续实验提供思路。

 
 
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