邓雨昕; 唐昌青; 马凡; 张怡; 周开宇; 华益民; 王川

doi:10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2018.01.003

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ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性研究

中华妇幼临床医学杂志（电子版）, 2018,14(1) : 18-24. DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2018.01.003

摘要

目的

探讨ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性。

方法

选择2013年3月至2015年3月，于四川大学华西第二医院儿童心血管科就诊，并被确诊为先天性间隔缺损的300例患儿为研究对象，纳入病例组。其中，单纯膜周部室间隔缺损(Pm-VSD)及继发孔型房间隔缺损(s-ASD)各为150例，分别纳入Pm-VSD亚组与s-ASD亚组。选择同期因单纯呼吸道感染于病例组同一家医院住院治疗的300例患儿，纳入对照组。采用PCR测序，对病例组与对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型进行检测。采用成组t检验，对病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿的年龄进行比较。采用χ²检验，对病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿性别构成比、ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型频率进行比较。采用单因素非条件logistic回归分析，对病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率进行比较。本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会所制定的伦理学标准，得到该委员会批准，分组征得受试患儿监护人的知情同意，并与之签署临床研究知情同意书。

结果

①病例组及对照组、Pm-VSD亚组及与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿的性别构成比及年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。②病例组、Pm-VSD亚组、s-ASD亚组及对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布，均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ²＝0.880，P＝0.820；χ²＝0.246，P＝0.913；χ²＝1.042，P＝0.748；χ²＝0.110，P＝0.925)。③病例组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型频率分别为67.0%(201/300)、30.7%(92/300)、2.3%(7/300)，对照组分别为80.7%(242/300)、18.0%(54/300)、1.3%(4/300)，Pm-VSD亚组分别为62.3%(94/150)、35.1%(52/150)、2.6%(4/150)，s-ASD亚组分别为71.3%(107/150)、26.7%(40/150)、2.0%(3/150)，病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型频率比较，差异均有统计学意义(χ²＝14.503，P＝0.001；χ²＝17.132，P<0.001；χ²＝5.005，P＝0.042)。④对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，病例组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.0，95%CI：1.4～3.0，P<0.001；OR＝1.9，95%CI：1.3～2.6，P<0.001)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿先天性间隔缺损发病风险，是GG基因型患儿的2.0倍；携带A等位基因患儿先天性间隔缺损发病风险，是携带G等位基因患儿的1.9倍。但是，2组ABCC 2基因1249G>A多态位点显性模型(GG/GA、AA)基因型频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。⑤在对先天性心脏病(CHD)类型进行分层分析后，对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，Pm-VSD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.5，95%CI：1.6～3.9，P<0.001；OR＝2.2，95%CI：1.5～3.2，P<0.001)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿Pm-VSD发病风险，是GG基因型患儿的2.5倍。携带A等位基因患儿Pm-VSD发病风险，是携带G等位基因患儿的2.2倍。s-ASD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型中，隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝1.6，95%CI：1.0～2.6，P＝0.040；OR＝1.6，95%CI：1.0～2.4，P＝0.038)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿s-ASD发病风险，是GG基因型患儿的1.6倍；携带A等位基因患儿s-ASD发病风险，是携带G等位基因患儿的1.6倍。

结论

ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损存在相关性。

引用本文: 邓雨昕, 唐昌青, 马凡, 等. ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性研究 [J/OL] . 中华妇幼临床医学杂志（电子版）, 2018, 14(1) : 18-24. DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2018.01.003.

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先天性心脏病(congenital heart disease，CHD)是最常见的出生缺陷，在活产新生儿中的发生率为0.7%～0.8%，该病现已成为导致活产新生儿婴儿期非感染性死亡的首要病因，给患儿及其家庭和社会带来巨大负担^[1,2,3]。CHD病因复杂，特定遗传背景下的胚胎在心脏发育过程中，受到环境因素的刺激导致心脏发育异常，被认为是CHD发病的重要原因。大量流行病学研究结果证实，围孕期毒物及药物暴露是导致CHD发生的独立危险因素^[4]。但是，对于妊娠前3个月及早孕期具有相同毒物或药物接触史的母体，其分娩的胎儿并非均罹患CHD。由此推测，在具有相同毒物或药物接触史背景下，CHD胎儿可能携带与毒物或药物外排相关基因的特定基因型，从而使其对于母亲围孕期毒物或药物暴露易感。

胎盘作为联系母体与胎儿之间的枢纽，对于胎儿的正常发育起着非常重要的作用，因为胎盘除了分泌多种激素，保证妊娠正常进行外，还控制着母体与胎儿之间的物质交换。研究结果证实，在胎儿毛细血管内皮细胞膜表面、滋养层细胞的顶膜面及基底膜面，均有不同类型膜转运蛋白表达，其对于母体与胎儿之间的物质交换起着极其重要的作用^[5,6]。这些膜转运蛋白中，对于母体与胎儿之间药物及毒物经胎盘转运作用最为重要、功能最为明确的是P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein，BCRP)及多重耐药蛋白(multidrug resistance protein，MRP)2。P-gp、BCRP及MRP2在人类分别由ABCB 1、ABCG 2及ABCC 2基因编码^[7]。

文献报道，ABCB 1及ABCG 2基因多态位点与CHD存在相关性^[8,9,10,11]。与P-gp及BCRP一样，MRP2也分布于血胎屏障合体滋养层细胞的顶膜面。由于ABCB 1及ABCG 2基因作用的极性及作用底物的广泛性，使其对于孕期母体血液中的许多物质具有外排作用，从而使胎儿在发育过程中可免受有害物质干扰^[12]。但是，关于ABCC 2基因多态位点与CHD的相关性研究，目前尚无文献报道。已有研究结果表明，ABCC 2基因1249G>A多态位点(rs3740066)，可影响胎盘组织中MRP2的表达^[13]。本研究拟探讨ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性，旨在为临床了解孕期母体有毒物或药物接触史的，可能携带与毒物或药物外排相关基因的特定基因型，从而为胎儿先天性间隔缺损易感研究提供参考。现将研究结果报道如下。

1　资料与方法

1.1　研究对象与分组

选择2013年3月至2015年3月，于四川大学华西第二医院儿童心血管科就诊，并被确诊为先天性间隔缺损的300例患儿为研究对象，纳入病例组。其中，单纯膜周部室间隔缺损(perimembranous ventricular septal defect，Pm-VSD)及继发孔型房间隔缺损(secundum atrial septal defect，s-ASD)各为150例，分别纳入Pm-VSD亚组与s-ASD亚组。选择同期因单纯呼吸道感染，于病例组同一家医院住院治疗的300例患儿，纳入对照组。本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会所制定的伦理学标准，得到该委员会批准，分组征得受试患儿监护人的知情同意，并与之签署临床研究知情同意书。

1.2　方法

1.2.1　纳入标准与排除标准

本研究病例组纳入标准：①罹患Pm-VSD或s-ASD者；②非复杂性CHD，如法洛四联症，或复合CHD，如室间隔缺损合并房间隔缺损者；③对于病例组患儿先天性间隔缺损的诊断，均通过心导管造影检查确诊。对照组纳入标准：①由于单纯呼吸道感染住院治疗的患儿；②对于对照组患儿单纯呼吸道感染的诊断，均由2位高年资医师确诊。病例组及对照组排除标准：①明确有CHD家族史的患儿；②合并遗传代谢综合征，如21-三体综合征患儿；③有其他心脏基础疾病，如心肌病患儿；④合并其他先天性畸形，如唇、颚裂患儿。

1.2.2　ABCC 2基因1249G>A多态性的检测方法

对于病例组及对照组患儿，分别在术中或患儿抽血检查时，采集1 mL全血至乙二胺四乙酸抗凝管中，置于－80 ℃冰箱保存，拟用于全血DNA提取，检测ABCC 2基因1249G>A多态性。①取上述保存、备用的全血样本600 μL，进行DNA提取，提取方法参照全血DNA小量提取试剂盒，即全血D3471-02 Omega Bio-tek基因组DNA提取试剂盒(批号：00R6934010000F12Q045，美国Omega Bio-tek公司)说明书严格操作。②对于提取的DNA，采用GeneQuant 100分光光度计(美国GE Healthcare公司)进行DNA浓度及纯度测定，于波长为260 nm与280 nm处，分别测定DNA吸光度(A)值，得到A260与A280的比值(A260/A280)为1.6～1.8，DNA浓度为0.095～0.127 mol/L。然后，将DNA浓度稀释为0.032～0.064 mol/L，置于4 ℃条件下保存，拟用于PCR测序获得ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型。③DNA扩增的PCR反应体系为：0.25 μL Taq DNA聚合酶(Takara)，2.50 μL 10×PCR缓冲液，1.00 μL dNTP(2.5 mmol/L)，0.50 μL正向引物(10 pmol/L)，0.50 μL反向引物(10 pmol/L)，1.00 μL DNA模板，19.25 μL ddH₂O，PCR反应体系总体积为25.00 μL。PCR反应条件为：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，64 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共计34个循环。DNA扩增完成后，采用2%琼脂糖鉴定PCR扩增产物，扩增片段为260 bp。确认DNA扩增成功后，将PCR扩增产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行ABCC 2基因1249G>A多态性基因型检测。ABCC 2基因1249G>A扩增引物序列如下，正向扩增引物为：5′-AACTTGGCCAGGAAGGAGTACAC-3′ (ABCC 2基因1249G>A-F) ，反向扩增引物为：5′-CTGGGTGACTTTTTCTTTACCTGAATG-3′(ABCC 2基因1249G>A-R) 。

1.3　统计学分析方法

本研究数据采用SPSS 16.0统计学软件包进行统计学分析。采用Ssize软件估算满足本研究统计检验的最小样本量。采用Shapiro-Wilk检验，对患儿年龄进行正态性检验；采用Levene检验，对组间患儿年龄进行方差齐性检验。对于呈正态分布及方差齐性的计量资料，如患儿年龄，采用±s表示，2组比较，采用成组t检验。对病例组、Pm-VSD亚组、s-ASD亚组及对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布进行Hardy-Weinberg平衡检验，评估其是否符合Hardy-Weinberg平衡定律^[14]。对于患儿性别构成比，ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型及等位基因(G、A)频率等计数资料，采用率(%)表示，组间比较采用独立样本列联表资料的χ²检验。对病例组与对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析，确定导致先天性间隔缺损发病的独立危险因素。所有统计学检验采用双侧检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1　一般临床资料比较

本研究病例组、对照组、Pm-VSD亚组及s-ASD亚组患儿年龄分布均符合正态分布(P>0.05)；病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿年龄的总体方差齐(P>0.05)。病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组患儿的性别构成比、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

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表1

病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组一般临床资料比较

表1

病例组与对照组、Pm-VSD亚组与对照组、s-ASD亚组与对照组一般临床资料比较

组别	例数	性别[例数(%)]		年龄(月，±s)
组别	例数	男	女	年龄(月，±s)
病例组	300	122(40.7)	178(59.3)	40.4±9.2
Pm-VSD亚组	150	64(42.7)	86(57.3)	38.6±7.6
s-ASD亚组	150	58(38.7)	92(61.3)	42.6±9.8
对照组	300	122(40.7)	178(59.3)	39.2±8.4
检验值^a		χ²＝0.000		t＝1.668
P值		1.000		0.096

注：病例组为先天性间隔缺损患儿，对照组为因单纯呼吸道感染而住院治疗的患儿。^a表示病例组与对照组患儿性别构成比、年龄比较的检验值。Pm-VSD亚组vs对照组，性别构成比：χ²＝0.165，P＝0.685；年龄：t＝0.737，P＝0.462。s-VSD亚组vs对照组，性别构成比：χ²＝0.167，P＝0.683；年龄：t＝1.912，P＝0.057。Pm-VSD为单纯膜周部室间隔缺损，s-ASD为继发孔型房间隔缺损

2.2　ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布的Hardy-Weinberg平衡检验

病例组、Pm-VSD亚组、s-ASD亚组及对照组患儿的ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布，经Hardy-Weinberg平衡检验的结果显示，均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ²＝0.880，P＝0.820；χ²＝0.246，P＝0.913；χ²＝1.042，P＝0.748，χ²＝0.110，P＝0.925)。

2.3　ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布及不同遗传模型的基因型频率分布比较

2.3.1　病例组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率及不同遗传模型的基因型频率分布比较

病例组与对照组患儿ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型频率分布比较，差异有统计学意义(P＝0.001)，见表2。对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，病例组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.0，95%CI：1.4～3.0，P<0.001；OR＝1.9，95%CI：1.3～2.6，P<0.001)，见表3。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿先天性间隔缺损发病风险，是GG基因型患儿的2.0倍；携带A等位基因患儿先天性间隔缺损发病风险，是携带G等位基因患儿的1.9倍。但是，2组ABCC 2基因1249G>A多态位点显性模型(GG/GA、AA)基因型频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

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表2

病例组和对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布比较[例数(%)]

表2

病例组和对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布比较[例数(%)]

组别	例数	ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型
组别	例数	GG	GA	AA
病例组	300	201(67.0)	92(30.7)	7(2.3)
对照组	300	242(80.7)	54(18.0)	4(1.3)
χ²值			14.503
P值			0.001

注：病例组为先天性间隔缺损患儿，对照组为因单纯呼吸道感染而住院治疗的患儿

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表3

病例组(n＝300)和对照组(n＝300) ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率分布比较[例数(%)]

表3

病例组(n＝300)和对照组(n＝300) ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率分布比较[例数(%)]

不同遗传模型		病例组	对照组	OR值	OR值95%CI	P值
显性模型
	GG/GA	293(97.7)	296(98.7)	1.8	0.5～6.1	0.545
	AA	7(2.3)	4(1.3)
隐性模型
	GG	201(67.0)	242(80.7)	2.0	1.4～3.0	<0.001
	GA/AA	99(33.0)	58(19.3)
等位基因
	G	494(82.3)	538(89.7)	1.9	1.3～2.6	<0.001
	A	106(17.7)	62(10.3)

注：病例组为先天性间隔缺损患儿，对照组为因单纯呼吸道感染而住院治疗的患儿

2.3.2　Pm-VSD亚组及s-ASD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率及不同遗传模型的基因型频率分布比较

在对CHD类型进行分层分析后，对Pm-VSD亚组及s-ASD亚组分别和对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点GG、GA、AA基因型频率分布比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)，见表4。对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，Pm-VSD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.5，95%CI：1.6～3.9，P<0.001；OR＝2.2，95%CI：1.5～3.2，P<0.001)，见表5。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿Pm-VSD发病风险，是GG基因型患儿的2.5倍；携带A等位基因患儿Pm-VSD发病风险，是携带G等位基因患儿的2.2倍。s-ASD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型中，隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝1.6，95%CI：1.0～2.6，P＝0.040；OR＝1.6，95%CI：1.0～2.4，P＝0.038)，见表5。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿s-ASD发病风险，是GG基因型患儿的1.6倍；携带A等位基因患儿s-ASD发病风险，是携带G等位基因患儿的1.6倍。

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表4

Pm-VSD亚组及s-ASD亚组分别和对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布比较[例数(%)]

表4

Pm-VSD亚组及s-ASD亚组分别和对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点基因型频率分布比较[例数(%)]

组别	例数	ABCC2基因1249G>A多态位点基因型
组别	例数	GG	GA	AA
Pm-VSD亚组	150	94(62.3)	52(35.1)	4(2.6)
s-ASD亚组	150	107(71.3)	40(26.7)	3(2.0)
对照组	300	242(80.7)	54(18.0)	4(1.3)

注：对照组为因单纯呼吸道感染而住院治疗的患儿。Pm-VSD亚组vs对照组：χ²＝17.132，P<0.001；s-ASD亚组vs对照组：χ²＝5.005，P＝0.042。Pm-VSD为单纯膜周部室间隔缺损，s-ASD为继发孔型房间隔缺损

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表5

Pm-VSD亚组(n＝150)及s-ASD亚组(n＝150)分别和对照组(n＝300) ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率分布比较[例数(%)]

表5

Pm-VSD亚组(n＝150)及s-ASD亚组(n＝150)分别和对照组(n＝300) ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率分布比较[例数(%)]

不同遗传模型		Pm-VSD亚组	s-ASD亚组	对照组	Pm-VSD亚组与对照组			s-ASD亚组与对照组
不同遗传模型		Pm-VSD亚组	s-ASD亚组	对照组	OR值	OR值95%CI	P值	OR值	OR值95%CI	P值
显性模型
	GG/GA	146(97.3)	147(98.0)	296(98.7)	2.0	0.5～8.2	0.450	1.5	0.3～6.8	0.691
	AA	4(2.6)	3(2.0)	4(1.3)
隐性模型
	GG	94(62.3)	107(71.3)	242(80.7)	2.5	1.6～3.9	<0.001	1.6	1.0～2.6	0.040
	GA/AA	56(37.7)	42(28.7)	58(19.3)
等位基因
	G	240(80.0)	254(84.7)	538(89.7)	2.2	1.5～3.2	<0.001	1.6	1.0～2.4	0.038
	A	60(20.0)	46(15.3)	62(10.3)

注：对照组为因单纯呼吸道感染而住院治疗的患儿。Pm-VSD为单纯膜周部室间隔缺损，s-ASD为继发孔型房间隔缺损

3　讨论

本研究首次在国内外探究ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性，并且研究结果表明，ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损存在相关性。许多体内及体外研究结果均证实，MRP2可减少孕期母体体内的毒物或药物进入胎儿体内^[5,12]。例如，使用MRP2抑制剂对孕期母体进行干预后，阿替洛尔(MRP2底物)经胎盘转运率明显增加^[14]。流行病学资料表明，母体围孕期部分药物或毒物接触，可显著增加胎儿罹患CHD的风险^{[4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15]}。因此，胎盘中MRP2的个体间表达差异，可能是母体围孕期接触药物或毒物后，胎儿CHD易感性不同的重要原因之一。

单核苷酸多态(single-nucleotide polymorphism，SNP)是引起个体间蛋白表达差异的重要因素之一。迄今，在人群中发现的ABCC 2基因SNP有80多种，其中1249G>A多态位点已被大多数研究结果所证实，可影响不同组织中MRP2表达，并与许多疾病的发生、预后相关^[14]。目前仅有1篇文献报道了ABCC 2基因1249G>A多态位点与胎盘中MRP2表达的相关性。该研究结果表明，携带ABCC 2基因1249G>A多态位点GA/AA基因型的胎盘，其MRP2表达水平较携带GG基因型的胎盘明显降低^[13]。由于胎盘中的MRP2来源于胎儿，由此推测，胎儿携带ABCC 2基因1249G>A多态位点GA/AA基因型时，其胎盘中MRP2表达水平降低，这可能导致母体围孕期所接触的药物或毒物经胎盘转运率增加，进而增加胎儿CHD发病风险。这或许可以解释本研究结果中，ABCC 2基因1249G>A多态位点GA/AA基因型，可增加胎儿先天性间隔缺损发病风险的缘故。

本研究结果显示，对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率，进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，病例组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.0，95%CI：1.4～3.0，P<0.001；OR＝1.9，95%CI：1.3～2.6，P<0.001)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/ AA基因型患儿先天性间隔缺损发病风险，是GG基因型患儿的2.0倍；携带A等位基因患儿先天性间隔缺损发病风险，是携带G等位基因患儿的1.9倍。但是，病例组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点显性模型(GG/GA、AA)基因型频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。对CHD类型进行分层分析后，对ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率进行单因素非条件logistic回归分析的结果显示，Pm-VSD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝2.5，95%CI：1.6～3.9，P<0.001；OR＝2.2，95%CI：1.5～3.2，P<0.001)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿Pm-VSD发病风险，是GG基因型患儿的2.5倍；携带A等位基因患儿Pm-VSD发病风险，是携带G等位基因患儿的2.2倍。

本研究结果还显示，s-ASD亚组与对照组ABCC 2基因1249G>A多态位点不同遗传模型的基因型频率的单因素非条件logistic回归分析结果显示，隐性模型(GG、GA/AA)基因型频率与等位基因(G、A)频率比较，差异均有统计学意义(OR＝1.6，95%CI：1.0～2.6，P<0.040；OR＝1.6，95%CI：1.0～2.4，P＝0.038)。在隐性模型(GG、GA/AA)中，GA/AA基因型患儿s-ASD发病风险，是GG基因型患儿的1.6倍；携带A等位基因患儿s-ASD发病风险，是携带G等位基因患儿的1.6倍。

综上所述，胎盘MRP2可能在母体围孕期药物或毒物接触所致CHD的发生中起着重要作用^[15]，这为探索胎盘膜转运体是否参与心脏发育的相关研究提供了理论基础。但是，本研究纳入的样本量相对较小，而且CHD类型仅涉及Pm-VSD及s-ASD，尚需进一步在不同人群中扩大样本量及纳入不同CHD类型进行进一步研究、验证。此外，目前关于ABCC 2基因1249G>A多态位点与胎盘中MRP2表达的相关性研究，所纳入的样本量均较小，同时缺乏底物转运功能实验，因此尚需扩大样本量并进一步进行细胞实验加以证实。

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贡献者信息

邓雨昕

610041　成都，四川大学华西第二医院西部妇幼研究院心脏发育与早期干预研究室；611730　成都，成都七中嘉祥外国语学校郫县分校

唐昌青

610041　成都，四川大学华西第二医院西部妇幼研究院心脏发育与早期干预研究室；610041　成都，四川大学华西第二医院儿科、出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室

马凡

张怡

610041　成都，四川大学华西第二医院西部妇幼研究院心脏发育与早期干预研究室

周开宇

华益民

王川

通信作者

王川

Email：805101396@qq.com

关键词

ABCC 2基因; 1249G>A多态位点; 室间隔缺损; 房间隔缺损; 心脏病，先天性; 胎儿;

基金项目

四川省科技厅重点研发项目（2017SZ0117）

作者声明

邓雨昕，唐昌青，马凡，等. ABCC 2基因1249G>A多态位点与先天性间隔缺损的相关性研究[J/CD].中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2018, 14(1): 18-24.

历史

出版日期：2018-02-01

收稿日期：2017-10-11

修回日期：2018-01-19

Original Article

Associations between ABCC2 gene 1249G>A polymorphism and congenital isolated septal defects

Yuxin Deng, Changqing Tang, Fan Ma, Yi Zhang, Kaiyu Zhou, Yimin Hua, Chuan Wang

Published 2018-02-01

Cite as Chin J Obstet Gynecol Pediatr (Electron Ed), 2018, 14(1): 18-24. DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2018.01.003

Abstract

Objective

To explore the associations between ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism and congenital isolated septal defects.

Methods

From March 2013 and March 2015, a total of 300 children with congenital isolated septal defects from Department of Pediatric Cardiovascular, West China Second University Hospital, Sichuan University were selected as research subjects and enrolled as case group, while 300 children with respiratory tract infections and age, gender matched during the same period in the same hospital were recruited as control group. Case group was further divided into the perimembranous ventricular septal defect (Pm-VSD) subgroup (n=150) and the secondary atrial septal defect (s-ASD) subgroup (n=150). Genotypings of the ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism in case group and control group were performed by PCR sequencing. Independent-samples t test was used to compared the ages between case group and control group, Pm-VSD subgroup and control group, s-ASD subgroup and control group, respectively. Chi-square test was used to compare the gender ratios, and GG, GA, AA genotypes of ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism between case group and control group, Pm-VSD subgroup and control group, s-ASD subgroup and control group, respectively. Single-factor unconditional logistic regression analysis was used to compare genotypes frequencies of different genetic models in ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism between case group and control group, Pm-VSD subgroup and control group, s-ASD subgroup and control group, respectively. This study was approved by the Ethics Committee of Human Beings in West China Second University Hospital, Sichuan University and the guardians of every subject signed informed consent of clinical research.

Results

①There were no significant differences in the gender ratio and age between case group and control group, Pm-VSD subgroup and control group, s-ASD subgroup and control group, respectively (P>0.05). ②The genotypes distributions of ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism of case group, Pm-VSD subgroup, s-ASD subgroup, and control group all were in line with Hardy-Weinberg equilibrium law (χ²=0.880, P=0.820; χ²=0.246, P=0.913; χ²=1.042, P=0.748; χ²=0.110, P=0.925). ③The GG, GA, AA genotypes frequencies of ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism in case group were 67.0% (201/300), 30.7% (92/300), and 2.3% (7/300), respectively, 80.7% (242/300), 18.0% (54/300), and 1.3% (4/300), respectively in control group, 62.3% (94/150), 35.1% (52/150), and 2.6% (4/150), respectively in Pm-VSD subgroup, 71.3% (107/150), 26.7% (40/150), and 2.0% (3/150), respectively in s-ASD subgroup. The genotypes distributions of ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism were significantly different between control group and case group, Pm-VSD subgroup, and s-ASD subgroup (χ²=14.503, P=0.001; χ²=17.132, P<0.001; χ²=5.005, P=0.042). ④Results of single-factor unconditional logistic analysis for the different genetic models of ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism showed that, there were statistically significant differences between case group and control group in genotypes frequencies of recessive model (GG, GA/AA) (OR=2.0, 95%CI: 1.4-3.0, P<0.001) and allele frequencies of G and A (OR=1.9, 95%CI: 1.3-2.6, P<0.001), which meant that in the recessive model (GG, GA/AA), the onset risk of congenital septal defect in children with GA/AA genotypes was 2.0 times of that in children with GG genotype; and the onset risk of congenital septal defect in children with A allele was 1.9 times of that in children with G allele. However, there was no significant difference when applying the dominant model (P>0.05). ⑤The stratified analysis of congenital heart disease (CHD) subtypes demonstrated that, there were statistically significant differences between Pm-VSD subgroup and control group in genotypes frequencies of recessive model (GG, GA/AA) (OR=2.5, 95%CI: 1.6-3.9, P<0.001) and allele frequencies of G and A (OR=2.2, 95%CI: 1.5-3.2, P<0.001), which meant that in the recessive model (GG, GA/AA), the onset risk of Pm-VSD in children with GA/AA genotypes was 2.5 times of that in children with GG genotype; and the onset risk of Pm-VSD in children with A allele is 2.2 times of that in children with G allele. And there were statistically significant differences between s-ASD subgroup and control group in genotypes frequencies of recessive model (GG, GA/AA) (OR=1.6, 95%CI: 1.0-2.6, P=0.040) and allele frequencies of G and A (OR=1.6, 95%CI: 1.0-2.4, P=0.038), which meant that in the recessive model (GG, GA/AA), the onset risk of s-ASD in children with GA/AA genotypes was 1.6 times of that in children with GG genotype; and the onset risk of s-ASD in children with A allele is 1.6 times of that in children with G allele.

Conclusion

There is a significant association between ABCC 2 gene 1249G>A polymorphism and congenital isolated septal defects.

Key words:

ABCC 2 gene; 1249G>A polymorphism; Heart septal defects, ventricular; Heart septal defects, atrial; Heart disease, congenital; Fetus

Contributor Information

Yuxin Deng

Cardiac Development and Early Intervention Research Unit, West China Institute of Women and Children′s Health, West China Second University Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Pidu Campus of Jiaxiang Foreign Languages School Attached Chengdu No.7 Middle School, Chengdu 611730, Sichuan Province, China

Changqing Tang

Department of Pediatrics, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children (Sichuan University), Ministry of Education, West China Second University Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Fan Ma

Yi Zhang

Kaiyu Zhou

Yimin Hua

Chuan Wang

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