探讨孤独症谱系障碍(ASD)患儿血浆催产素和精氨酸后叶加压素(AVP)水平与ASD发病的关系。
选择2014年1月1日至2016年12月31日在首都儿科研究所就诊的40例ASD患儿为研究对象，年龄为2.0～12.0岁，并纳入ASD组。选择同期于同一医院进行体格检查的34例健康儿童纳入对照组，年龄为2.4～7.4岁。应用《儿童期孤独症评定量表》(CARS)和《精神疾病诊断与统计手册》第5版(DSM-5)对40例ASD患儿进行孤独症诊断及孤独症症状严重程度进行评定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量检测2组受试儿血浆催产素和AVP水平。采用成组t检验，比较2组受试儿血浆催产素和AVP水平；采用直线相关性分析，对血浆催产素、血浆AVP水平与CARS评分的相关性进行分析。本研究遵循的程序符合首都儿科研究所人体试验委员会制定的伦理学标准，得到该委员会批准(审批号为[2012]-004)，均与所有受试儿的法定监护人签署临床研究知情同意书。
①2组受试儿的年龄、性别构成比比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。② ASD组患儿血浆催产素水平为(359.2±103.3)pg/mL，显著低于对照组的(484.1±50.1)pg/mL，2组比较，差异有统计学意义(t＝－6.43，P<0.001)；ASD组患儿血浆AVP水平为(342.8±61.2)pg/mL，显著高于对照组的(312.2±39.2)pg/mL，2组比较，差异亦有统计学意义(t＝2.51，P＝0.014)。③相关性分析结果显示，ASD组患儿血浆催产素水平与CARS评分呈负相关关系(r＝－0.155，P＝0.032)，血浆AVP水平与CARS评分无相关关系(r＝0.032，P＝0.841)，血浆催产素水平与血浆AVP水平无相关关系(r＝0.191，P＝0.220)。对照组中，患儿血浆催产素水平与血浆AVP水平呈正相关关系(r＝0.631，P<0.001)。
ASD患儿血浆催产素水平降低，而血浆AVP水平升高，血浆催产素和AVP水平变化可能与ASD发病相关。
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孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder，ASD)是一种以社会交往功能障碍、语言交流障碍、兴趣或活动范围狭窄以及重复刻板行为等为特征的广泛性发育障碍。ASD的确切病因至今尚未阐明，目前认为是由外部环境因素(母体疾病、早孕期受致畸原影响、围生期损伤等)与遗传因素共同作用所致[1]。ASD的发病存在明显性别差异，男、女性儿童患病比例约为5∶1[2]，这提示激素在ASD发病过程中可能具有一定作用。近年来，催产素(oxytocin)与精氨酸后叶加压素(antidiuretic hormone，AVP)的亲社会性作用在动物研究和人类行为研究中已被大量报道，其与ASD发病的相关性越来越受到国内外学者的关注。文献报道，催产素缺乏[3]、代谢异常[4]或催产素受体异常[5]与ASD患儿社会交往功能障碍明显相关。而Tomova等[6]研究结果发现，ASD患儿血浆催产素水平高于健康同龄儿童。此外，对于ASD患儿血浆AVP与ASD相关性的研究结果亦不一致[7,8]。
本研究通过检测ASD患儿血浆催产素水平及AVP水平，旨在探讨ASD的发病机制。同时应用《儿童期孤独症评定量表》(Childhood Autism Rating Scale, CARS)对ASD患儿进行评估，分析ASD患儿血浆催产素、AVP水平与孤独症严重程度的相关性，旨在为ASD患儿的早期诊断及治疗提供依据。现将研究结果报道如下。
选择2014年1月1日至2016年12月31日在首都儿科研究所就诊的40例ASD患儿为研究对象，并纳入ASD组，年龄为2.0～12.0岁。选择同期于同一医院进行体格检查的34例健康儿童纳入对照组，年龄为2.4～7.4岁。本研究ASD组患儿纳入标准：①符合2010年卫生部制定的《儿童孤独症诊疗康复指南》中对ASD的诊断标准[9]。② CARS评分≥30分的ASD患儿。排除标准：①伴随其他神经系统疾病的ASD患儿，如脆性X综合征、结节性硬化、唐氏综合征等。②同时接受其他治疗的ASD患儿，如服用抗精神病药物、干细胞移植治疗等。③患儿或患儿监护人拒绝接受本研究所涉及的相关检查。本研究遵循的程序符合首都儿科研究所人体试验委员会制定的伦理学标准，得到该委员会批准(审批号为[2012]-004)，均与所有受试儿的法定监护人签署临床研究知情同意书。
本研究应用CARS和《精神疾病诊断与统计手册》第5版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-fifth edition, DSM-5)[9]对患儿进行孤独症诊断及孤独症症状严重程度进行评定。CARS量表共计15个项目，每个项目计分为0～4分。CARS量表总分<30分判断为非孤独症，总分为30～36分判断为轻至中度孤独症，总分≥36分判断为重度孤独症[10]。
本研究2组患儿均于抽血前休息30 min，于8：00 am至10：00 am抽取空腹静脉血6 mL，置于乙二胺四乙酸二钾(ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium salt，EDTA-K2)抗凝管中，常温静置30 min后于4 ℃下1 500×g离心15 min，分离血浆，并将血浆放置于－80 ℃环境中冻存待用。应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法测定2组患儿血浆催产素、AVP水平，具体步骤如下。将标准品和待测血浆各50 μL加入微孔条中，每孔加50 μL酶标抗体，封住反应孔在37 ℃环境中孵育1 h，之后弃去孔内液体，洗涤3次，每孔加酶标二抗各100 μL，在37 ℃环境中孵育1 h，之后弃去孔内液体，洗涤3次，每孔加显色剂，放置于37 ℃环境中避光显色20 min，待充分显色后每孔加终止液50 μL终止反应。采用Enspire型多功能酶标仪(美国PerkinElmer公司)于波长为405 nm处测量各孔吸光值(OD值)，建立血浆催产素及AVP校正曲线后，对血浆催产素及AVP水平进行分析。本研究严格按照人催产素ELISA试剂盒(批号：AK0016SEP21012，武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司)及人AVP ELISA试剂盒(批号：AK0016SEP21013，武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司)说明书操作步骤进行。
本研究所得数据采用SPSS 19.0统计学软件包进行统计学处理，并采用Ssize软件，确定满足本研究统计检验的最小样本量。首先对计量资料的分布状态进行分析，对年龄、血浆催产素水平、血浆AVP水平、CARS评分等呈正态分布的计量资料，采用
±s表示，组间比较，采用成组t检验。对年龄构成比等计数资料，采用率(%)表示，组间比较，采用χ2检验。对符合正态分布的计量资料血浆催产素水平、血浆AVP水平与CARS评分的相关性分析，采用直线相关性分析。所有统计学检验采用双侧检验，以P<0.05示差异有统计学意义。
2组受试儿的年龄和性别构成比比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。
2组受试儿的一般临床资料比较
2组受试儿的一般临床资料比较
| 组别 | 例数 | 性别[例数(%)] | 年龄(岁， ±s) | |
|---|---|---|---|---|
| 男 | 女 | |||
| ASD组 | 40 | 33(82.5) | 7(17.5) | 4.9±2.4 |
| 对照组 | 34 | 25(73.5) | 9(26.5) | 4.5±1.2 |
| 检验值 | χ2＝0.87 | t＝1.10 | ||
| P值 | 0.350 | 0.275 | ||
注：ASD为孤独症谱系障碍
ASD组患儿血浆催产素水平低于对照组健康儿童血浆催产素水平，2组比较，差异有统计学意义(P<0.001)。ASD组患儿血浆AVP水平高于对照组健康儿童，2组比较，差异亦有统计学意义(P＝0.014)。2组受试儿血浆催产素、AVP水平比较，见表2。
2组受试儿血浆催产素与AVP水平比较(pg/mL，
±s)
2组受试儿血浆催产素与AVP水平比较(pg/mL，±s)
| 组别 | 例数 | 血浆催产素水平 | 血浆AVP水平 |
|---|---|---|---|
| ASD组 | 40 | 359.2±103.3 | 342.8±61.2 |
| 对照组 | 34 | 484.1±50.1 | 312.2±39.2 |
| t值 | －6.43 | 2.51 | |
| P值 | <0.001 | 0.014 |
注：AVP为精氨酸后叶加压素，ASD为孤独症谱系障碍
ASD组患儿CARS评分为34～96分，平均为(66.2±17.5)分。ASD组患儿，血浆催产素水平与CARS评分呈负相关关系(r＝－0.155，P＝0.032)，血浆AVP水平与CARS评分无相关关系(r＝0.032，P＝0.841)，血浆催产素水平与血浆AVP水平无相关关系(r＝0.191，P＝0.220)。对照组儿童血浆催产素水平与血浆AVP水平呈正相关关系(r＝0.631，P<0.001)。
儿童ASD是一种异质性疾病，其病因至今尚未阐明。近年来，血浆催产素、AVP在中枢神经系统对社会交往的重要调节作用引起广泛关注[11,12,13]。来自神经生物化学、药理学、遗传学等多学科的研究结果均表明，血浆催产素、AVP水平与ASD的发生、发展有关。Modahl等[14]研究结果显示，ASD患儿血浆催产素水平低于正常同龄儿童，并且催产素水平的降低程度与ASD患儿社会交往功能障碍严重程度明显相关，首次提出催产素缺乏可能是导致ASD患儿社交障碍的原因。另有文献报道，外源性给予催产素可以减轻ASD患儿的社交焦虑，对改善ASD患儿的刻板行为和语言感知具有一定作用，从而从药理学治疗的角度，对ASD的治疗提供了间接证据[15,16]。Walum等[17]研究结果显示，催产素受体(oxytocin receptor，OXTR)基因单核苷酸多态性rs7632287与儿童期的社交行为、成年期的成对结合行为以及对ASD的易感性相关，rs3796863与血浆催产素水平较低有关[18]，也与ASD发病相关。上述受体分布不同造成效应的差别，可能预示着受体基因表达过程中的调控也可能对ASD和血浆催产素之间的相关性产生影响。本研究对40例ASD患儿和34例健康儿童的血浆催产素水平的调查结果显示，ASD患儿血浆催产素水平显著低于对照组，并且差异有统计学意义(P<0.001)，再次验证了儿童ASD低催产素血症生化假说这一重复性高的病因学研究结果。但并非所有ASD患儿血浆催产素水平均低于正常参考值范围，这可能与儿童ASD系一种异质性疾病有关，这提示血浆催产素水平降低可能是部分ASD患儿的发病机制之一。Labuschagne等[19]研究结果显示，催产素改善ASD患儿社会交往功能障碍的作用机制可能与其对杏仁核的负性调控有关。外源性催产素的补充可使部分ASD患儿体内血浆催产素水平升高，杏仁核活动度降低，进而改善ASD患儿的社会交往功能障碍。
AVP作为与催产素结构高度保守的9肽，二者的肽链结构仅存在第3位和第8位氨基酸不同，在这种结构上的类似使其生理功能存在部分交叉，二者均在认知、记忆、情绪和行为调节等方面发挥重要的生理作用。但是迄今为止，尽管受到国内外学者的广泛关注，血浆AVP与ASD水平相关性的研究结论尚不一致。Zhang等[20]研究结果显示，ASD患儿血浆AVP水平与健康儿童比较，差异无统计学意义(P>0.05)。而Al-Ayadhi[21]对阿拉伯人群的研究结果显示，ASD患儿血浆AVP水平低于正常对照组儿童，并且差异有统计学意义(P<0.05)；Boso等[8]对意大利人群的研究结果发现，ASD患儿血浆AVP水平明显高于健康儿童，并且差异有统计学意义(P<0.05)。本研究结果亦显示，ASD组患儿血浆AVP水平高于健康儿童，并且差异亦有统计学意义(P＝0.014)。该结果仍需要大样本量的随机对照研究进一步验证。
Al-Ayadhi[21]研究结果发现，ASD患儿血浆催产素水平越高，言语交流障碍症状程度越轻，而血浆AVP水平越高，非言语交流障碍症状程度相对越轻。Miller等[7]发现在女性ASD患儿中，血浆AVP水平与重复刻板行为的严重程度呈正相关关系，而在男性ASD患儿中，二者之间呈负相关关系。但是本研究结果显示，ASD患儿血浆催产素水平与CARS评分呈负相关关系(r＝－0.155，P＝0.032)，这提示ASD患儿血浆催产素水平越低，疾病严重程度越重；而ASD患儿血浆AVP水平则与CARS评分无明显相关性。上述研究结果不一致可能与各研究纳入对象的年龄、种族及疾病严重程度不一致有关，因此尚需要多中心、大样本、随机对照研究进一步证实。此外，Zhang等[20]研究结果发现，健康成年女性血浆AVP水平与催产素水平呈正相关关系。本研究结果亦显示，健康儿童血浆催产素水平与AVP水平呈正相关关系(r＝0.631，P<0.001)，这提示此2种神经肽有相似的合成及释放机制，而这种正相关关系在ASD患儿中并无体现(r＝0.191，P＝0.220)。究其原因，可能为ASD患儿血浆催产素及AVP水平发生了改变，从而扰乱了这种正相关关系。
本研究结果显示，ASD患儿血浆催产素水平较健康儿童明显降低、AVP水平明显升高，从生化机制角度反映了血浆催产素和AVP水平变化与ASD发生、发展及严重程度之间的关系。这将为今后探讨儿童ASD的早期诊断及治疗提供依据。
