基础研究
慢病毒构建表达人β-防御素3的滑膜间质干细胞及其抑菌活性鉴定
中华骨科杂志, 2015,35(11) : 1168-1176. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2015.11.014
摘要
目的

检测利用慢病毒介导人β-防御素3 (humanβ-defensin 3, hβD-3)基因转染人滑膜间质干细胞(synoviumderived mesenchymal stem cells,SMSCs)的安全性及体外抗菌活性。

方法

通过膝关节镜手术获取人膝关节交叉韧带及滑膜组织以分离、培养SMSCs,贴块法培养并用磁珠分选仪纯化,通过显微镜观察、免疫荧光鉴定和细胞表面标记对细胞进行鉴定。通过成脂、成骨和成软骨分化诱导分别对细胞多向分化潜能进行测定。利用质粒构建包含hβD-3基因的慢病毒载体并转染SMSCs,绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪确定其DNA含量,使用NOD/SCID小鼠验证其致瘤性。使用琼脂扩散法对转染后的SMSCs进行抑菌活性检测,同时用兔膝关节内金黄色葡萄球菌感染模型验证其体内抑菌作用。

结果

贴块法获得的SMSCs经分离纯化后表现出间质干细胞应有的结构和表面标志物,具有多向分化潜能。免疫荧光证实被慢病毒转染的SMSCs能稳定表达hβD-3蛋白。增殖动力学、核型分析、致瘤型分析等证实转染后的SMSCs安全。重组细胞体外和动物模型体内抑菌活性检测显示,传代后的SMSCs(采用P5代细胞)能稳定表达hβD-3并具有抗菌活性。与阴性、阳性对照组比较,低浓度组有一定的抑菌活性,并且随浓度增高,抑菌圈逐渐增大。

结论

经重组慢病毒载体感染的人SMSCs能安全稳定地传代并表达hβD-3,体外具有明显的抗菌活性。

引用本文: 殷杏, 丛锐军, 吴宇黎, 等.  慢病毒构建表达人β-防御素3的滑膜间质干细胞及其抑菌活性鉴定 [J] . 中华骨科杂志,2015,35 (11): 1168-1176. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2015.11.014
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感染是人工关节置换术后最严重的并发症之一,如何有效解决假体置换术后感染、降低致残率是目前尚未解决的难题。1976年Gristina等[1]首先提出假体感染的难治性与假体周围生物膜形成有关。这种生物膜依靠独特的结构帮助细菌逃避宿主的免疫机制以及抗生素的攻击;同时膜内细菌严重耐药,其耐药性可达同类浮游细菌的1 000倍以上[2,3,4,5],很难被目前临床所应用的抗生素杀灭。因此,探寻可阻止生物膜形成甚至消除生物膜的新型抗菌药物已成为关节外科研究的重点内容之一。

 
 
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