麻醉并发症
PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备
中华麻醉学杂志, 2017,37(8) : 939-942. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2017.08.011
摘要
目的

制备蛋白质转导结构域4-铜锌超氧化物歧化酶(PTD4-Cu,Zn-SOD)融合蛋白。

方法

分别将pET16b-Cu,Zn-SOD蛋白和pET16b-PTD4-Cu,Zn-SOD重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞E.coli BL21(DE3)中;加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(终浓度0.84 mmol/L)孵育4 h,诱导Cu,Zn-SOD和PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白表达;经过溶菌酶和超声裂解细菌,取上清液,行15% SDS-PAGE电泳分析目的蛋白的表达情况。利用Ni-NTA His结合树脂在天然条件下纯化获得Cu,Zn-SOD蛋白和PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白,采用Western blot法鉴定目的蛋白。

结果

Western blot结果显示目的蛋白纯度为90%,可见分子量约为19 kDa的Cu,Zn-SOD蛋白条带和分子量约为20 kDa的PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白条带。

结论

成功制备了PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白。

引用本文: 党莎杰, 卫文博, 韩丽春, 等.  PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备 [J] . 中华麻醉学杂志, 2017, 37(8) : 939-942. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2017.08.011.
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脑缺血再灌注损伤是围术期常见的并发症,氧自由基产生过多及SOD的消耗是脑缺血性损伤的重要病理生理机制[1]。铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)可将超氧阴离子自由基分解成过氧化氢而进一步分解,改善脑水肿,减少脑缺血时的功能损伤。而Cu,Zn-SOD为生物大分子,细胞膜没有特异性受体和通道,也不能依靠内吞作用等入胞方式进入细胞内,加之血脑屏障的阻碍,限制了其在脑缺血再灌注损伤治疗中的应用[2,3,4]

 
 
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