基础研究
巨噬细胞抑制因子-1对老年膝骨关节炎软骨细胞增殖代谢影响的实验研究
中华风湿病学杂志, 2019,23(12) : 839-844,C3. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-7480.2019.12.009
摘要
目的

观察不同浓度巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)对老年膝OA患者软骨细胞增殖代谢的影响。

方法

收集健康年轻人和老年膝OA患者的血清、膝关节软骨标本各10例,检测标本中MIC-1的含量变化。常规培养人软骨细胞,对照组单纯加培养液,实验组培养液中含不同浓度重组人MIC-1蛋白,其中,实验组1浓度为10 ng/ml,实验组2浓度为100 ng/ml和实验组3浓度为200 ng/ml,培养48 h后,5-乙炔基-2-脱氧尿苷(EdU)检测软骨细胞增殖情况,蛋白质印迹法和实时荧光定量(qRT)-PCR检测软骨细胞pSmad2、Smad2和Col2等指标的表达情况。统计学分析采用t检验,单因素方差分析(ANOVA),Tukey法。

结果

年轻人血清中MIC-1蛋白相对表达量(0.89±0.11)高于老年人(0.48±0.12),差异有统计学意义(t=2.58,P<0.05)。对照组EdU阳性细胞百分比为(26.8±1.5)%,实验组1为(26.2±1.6)%,实验组2为(35.2±1.8)%,实验组3为(45.6±2.7)%,多组间比较差异有统计学意义(F=21.45,P<0.01)。pSmad2蛋白相对表达量在多组之间比较差异有统计学意义(F=18.32,P<0.01),其中,实验组2(1.25±0.11)和实验组3(0.93±0.22)分别高于对照组(0.54±0.10);多组比较Col2蛋白相对表达量差异有统计学意义(F=17.90,P<0.01),其中,实验组2(1.28±0.14)和实验组3(1.74±0.14)分别高于对照组(0.80±0.04)。Col2的mRNA相对表达量在多组间比较差异有统计学意义(F=17.90,P<0.01),其中,实验组2(1.13±0.16)和实验组3(1.65±0.15)分别高于对照组(0.49±0.10)。

结论

老年膝OA患者血清和软骨组织MIC-1含量低于年轻人,MIC-1可以促进老年膝关节软骨细胞增殖。

引用本文: 王东明, 翟旭雯, 耿翔, 等.  巨噬细胞抑制因子-1对老年膝骨关节炎软骨细胞增殖代谢影响的实验研究 [J] . 中华风湿病学杂志, 2019, 23(12) : 839-844,C3. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-7480.2019.12.009.
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OA是一种关节软骨疾病,衰老是OA发生发展的主要危险因素之一[1]。在年龄相关OA中,由于软骨细胞老化导致软骨细胞外基质中成份的改变,如糖胺多糖和Ⅱ型胶原(Collagen type Ⅱ,Col2)的减少,MMP-13含量增加等,最终导致软骨变脆和更容易受到外力刺激而受损[2]。TGF-β通路在软骨细胞老化过程中起到了很重要的作用,因为老年软骨细胞比年轻软骨细胞更依赖于TGF-β通路,而TGF-β维护健康的软骨主要是通过磷酸化其信号通路中的Smad2/3[3,4,5]。巨噬细胞抑制因子(MIC)-1又名NSAIDs激活基因1(nonste-roidal anti-inflammatory drug-activated gene,NAG1)、胎盘TGF-β(placental TGF-β,PTGFB)或者TGF-15,属于TGF-β超家族一员[6],MIC-1可以通过诱导p53抑制肿瘤生长[7],能够抑制内皮细胞凋亡[8],血液中MIC-1含量增高后在炎症过程中发挥了抗炎作用[9],MIC-1还可以在TGF-β信号通路中通过磷酸化Smad2/3(pSmad2/3)抑制心肌肥厚,对心脏具有保护作用[10,11],而在TGF-β信号通路中,pSmad2可以促进软骨细胞增殖[12]。那么,本研究提出科学假设:MIC-1能够磷酸化Smad2,能够促进软骨细胞增殖和分泌Col2。此外,目前尚无MIC-1影响老年软骨细胞增殖代谢的相关报道,因此,为了验证这一科学假设,本研究在体外实验中模拟体内环境,选择老年膝OA患者软骨细胞,培养液中添加重组人MIC-1蛋白(rMIC-1),观察Smad2的磷酸化情况以及老年软骨细胞的增殖代谢情况。

 
 
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