范海涛; 李恒; 郭磊; 王晶晶; 储曼曼; 黄星; 郑惠文; 杨泽宁; 李洪哲; 刘龙丁

doi:10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2018.03.001

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白细胞介素1受体1和白细胞介素6双基因敲除小鼠的构建及基因型鉴定

国际免疫学杂志, 2018,41(3) : 251-255. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2018.03.001

摘要

目的

通过白细胞介素1受体1 (interleukin-1 receptor1, IL-1R1)和白细胞介素6 (interleukin-6，IL-6)单基因敲除小鼠杂交繁育以获得IL-1R1^-/-IL-6^-/-纯合子小鼠。

方法

将IL-1R1^＋/＋IL-6^-/-和IL-1R1^-/-IL-6^＋/＋小鼠杂交，并进行子代自交繁殖，提取基因组DNA，PCR鉴定其自交子代基因型。并用免疫印迹法(Western blot)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)确定自交小鼠后代基因型。

结果

PCR鉴定成功获得基因型为IL-1R1^-/-IL-6^-/-的双基因敲除小鼠。Western blot结果显示，双基因敲除小鼠未见IL-1R1的蛋白条带；ELISA结果提示，双基因敲除小鼠的IL-6细胞因子为阴性。

结论

成功获得IL-1R1^-/-IL-6^-/-双基因敲除纯合小鼠，为深入研究IL-1R1、IL-6基因相关的炎症疾病动物模型奠定基础。

引用本文: 范海涛, 李恒, 郭磊, 等. 白细胞介素1受体1和白细胞介素6双基因敲除小鼠的构建及基因型鉴定 [J] . 国际免疫学杂志, 2018, 41(3) : 251-255. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2018.03.001.

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白细胞介素1(interleukin-1，IL-1)是一种强有力的促炎症细胞因子，能够引起机体发热，对细胞的增殖、分化，多种先天免疫功能都有促进作用^[1]。IL-1可诱导T淋巴细胞合成IL-2和表达IL-2受体，促进T淋巴细胞因子释放并促进T细胞的分裂增殖^[2]。IL-1主要的受体是IL-1 receptor 1(IL-1R1)，是一种糖蛋白，相对分子质量约为80 000，介导了IL-1大部分的生理功能^[3]。IL-1R1是细胞外配基结合部位，由3个免疫球蛋白样结构域组成，胞内部分大约有200个氨基酸残基，其C末端片段会被TRAF-6依赖的胞内蛋白酶γ-分泌酶水解，释放可以进行泛素化的胞质结构域，从而参与细胞内信号转导^[4]。白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)有调节免疫应答、造血系统、肿瘤生长、神经内分泌系统及诱导急性期蛋白的作用^[5]。IL-6与IL-1可协同促进T细胞增殖，参与炎症反应和发热反应，本实验成功构建了IL-1R1^-/-IL-6^-/-双基因敲除小鼠，为开展IL-6、IL-1炎性因子相关的炎症性疾病及其作用机制的动物实验提供基础。

贡献者信息

范海涛

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所；650031　昆明医科大学

李恒

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

郭磊

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

王晶晶

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

储曼曼

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

黄星

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

郑惠文

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

杨泽宁

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

李洪哲

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

刘龙丁

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

通信作者

刘龙丁

650031　昆明，中国医学科学院，北京协和医学院医学生物学研究所

Email：longdingl@gmail.com

关键词

白细胞介素-1受体1; 白细胞介素-6; 基因敲除小鼠; 基因型鉴定;

基金项目

国家自然科学基金（81373142）

云南省科技创新人才计划（2016HC009）

历史

出版日期：2018-05-05

收稿日期：2017-03-05

Laboratory Research

Construction and genotype identification of IL-1R1^-/-IL-6^-/-gene mice

Haitao Fan, Heng Li, Lei Guo, Jingjing Wang, Manman Chu, Xing Huang, Huiwen Zheng, Zening Yang, hongzhe Li, Longding Liu

Published 2018-05-05

Cite as Int J Immunol, 2018, 41(3): 251-255. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2018.03.001

Abstract

Objective

To construct mice with the knockout of both interleukin 1 receptor 1 (IL-1R1) and interleukin 6 (IL-6) genes.

Methods

We generated the IL-1R1^{+ /-}IL-6^{+ /-}offspring by crossing the IL-1R1^{+ /+} mice with IL-6^{+ /+} mice.DNA was extracted from the ear tissue of mouse offspring fand and subjected to PCR for genotype identification.Mice with IL-1R1^-/-IL-6^-/-were identified.Mice with the genotype of IL-1R1^-/-IL-6^-/-were further confirmed by the analysis of Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).

Results

Two mice with genotype of IL-1R1^-/-IL-6^-/-were obtained. Western blot and ELISA analysis showed IL-1R1 and IL-6 were not expressed in IL-1R1^-/-IL-6^-/-mice.

Conclusion

We have successfully established IL-1R1^-/-IL-6^-/-gene-knockout mice.This work would provide foundation for the further study of the inflammatory diseases related to IL-1R1 and IL-6.

Key words:

Interleukin-1receptor1; Interleukin-6; Gene-knockout mice; Genotype identification

Contributor Information

Haitao Fan