验证卫生标准研制项目的血清碘的砷铈催化分光光度测定方法（简称本方法）的可行性及应用价值。
收集成人血液样品，制备含0 ~ 300 μg/L的碘标准曲线，参照《生物材料中化学物质的测定方法》，对本方法的线性关系、最低检测限、精密度和准确度进行实验验证，评价验证结果。
在0 ~ 300 μg/L标准曲线范围内，相关系数为- 0.999 7 ~ - 0.999 4（n = 6），最低检测限为5.13 μg/L（取样量为100 μl）。对3种不同碘浓度血清样进行重复测定，精密度验证显示，变异系数分别为0.89%、1.88%、0.67%；准确度验证显示，加碘标回收率为93.90% ~ 107.04%，总平均回收率为99.48%。
经验证，本方法应用于血清碘含量测定具有标准曲线线性关系好、精密度好、准确性高，符合生物样品分析的要求，适合推广应用。
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在我国碘缺乏病监测中，甲状腺功能指标一般被认为是评价个体碘营养的金指标[1]，但是由于甲状腺功能异常还与其他某些疾病相关，而且若碘不足或过量可能会导致甲状腺功能出现异常，作为碘营养的评价指标从时间上来讲明显滞后。肾脏是碘的主要排泄器官，采样破坏性小，因此尿碘成为目前监测人群碘营养水平最为普遍的指标[2,3,4]，但由于尿液是开放式的，尿中碘含量易受个体的饮食中的含碘量、个体饮水量和排汗量有很大影响，而作为相对封闭的血液，血清中碘相对比较稳定，能较真实地反映机体的碘营养状况，可以反映近期碘营养状况，对个体碘营养的评价更有价值[5]。本实验室对该方法的部分实验进行了方法学验证工作，现将验证结果报道如下。
分光光度计（上海光谱723型）；恒温消解仪（北京兰星光AED-UI）；超级恒温水浴箱（德国艾卡IB20Pro，控温精度± 0.05 ℃）；硬质玻璃试管（15 mm × 120 mm）。
高氯酸、氯酸钠（分析纯），购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；三氧化二砷（分析纯），由美国进口分装；浓硫酸（优级纯）、氯化钠（优级纯）、氢氧化钠（优级纯）、硫酸铈铵（分析纯）、碘酸钾（基准试剂），购自国药集团化学试剂有限公司；去离子水，符合《分析实验室用水规格和试验方法》（GB/T 6682-2008）二级水规格，电导率≤1.0 μS/cm。
称取106.5 g氯酸钠，加入450 ml纯水溶解，再加纯水稀释至500 ml，4 ℃保存。
取140 ml浓硫酸缓慢加入到700 ml纯水中，边加边搅拌，冷却后用水稀释至1 000 ml。
称取2.5 g三氧化二砷、3.0 g氢氧化钠，置于1 000 ml的烧杯中，加纯水约30 ml搅拌至全部溶解，向烧杯中加纯水约500 ml，并加入40.0 g氯化钠，搅拌至完全溶解，再缓慢加入200 ml硫酸溶液，至室温后用纯水稀释至1 000 ml，储于棕色瓶，室温放置可保存6个月。
称取16.7 g四水合硫酸铈铵[Ce（NH4）4（SO4）4·4H2O]溶于700 ml、2.5 mol/L硫酸溶液中，用纯水稀释至1 000 ml，储于棕色瓶，室温放置可保存6个月。
①碘标准储备溶液[ρ（I）= 100 g/L]：准确称取经105 ~ 110 ℃烘干至恒重的碘酸钾0.168 6 g于烧杯中，用水溶解后定量转移入1 000 ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度，此溶液1 ml含碘100 mg。储于具塞严密的棕色瓶，置冰箱（4 ℃）可保存6个月。②碘标准中间溶液（ρ（I）= 10 g/L）：吸取10.00 ml碘标准储备溶液[ρ（I）= 100 g/L]于100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液1 ml含碘10 mg。储于具塞严密的棕色瓶，置冰箱（4 ℃）内可保存1个月。③碘标准使用系列溶液[ρ（I）= 0 ~ 300 μg/L]：临用时吸取碘标准中间溶液[ρ（I）= 10 g/L]0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml分别置于100 ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度，此标准系列溶液的碘浓度分别为0、50、100、150、200、250、300 μg/L。
采集正常人体检且同血型的混合全血样品，室温静置0.5 h后，于3 000 r/min离心10 min（离心半径= 8 cm），分离出血清置于具塞聚乙烯塑料管中，严密封口。实验中碘含量高于90 μg/L的血清样，为10 ml正常血清加100 μg/ml碘酸钾标液2 ~ 20 μl混匀所得。
①血清样品前处理：分别取0.10 ml碘标准使用系列溶液及血清样（如果血清样的碘含量超过标准曲线中的碘含量范围，则纯水稀释后取样）各置于玻璃试管中，各管加入0.5 ml高氯酸、0.6 ml氯酸钠溶液，混匀后置于130 ℃的消化控温加热装置中，消化120 min，冷却至室温。然后置于30 ℃恒温水浴中，要求温度波动不超过± 0.1 ℃。②各管加入3.0 ml亚砷酸溶液，充分混匀后放置15 min，使其温度达到平衡（注意将标准系列管按碘含量由高至低顺序排列）。③秒表计时，依顺序每管间隔相同的时间（30 s或20 s）向各管准确加入0.60 ml硫酸铈铵溶液，立即混匀。④待第一管（即标准系列中300 μg/L碘含量管）的吸光度值（A）达到0.10左右时，依顺序每管间隔同样时间（30 s或20 s）于400 nm波长下，用1 cm比色杯，以纯水作参比，测定各管的吸光度值。⑤标准曲线绘制及血清碘含量计算：标准曲线的碘含量（C，μg/L）与吸光度值的回归方程为C = a + blgA或C = a + blnA，计算标准曲线的回归方程，将样品管的吸光度值代入此方程，求出所测样品中的碘含量，再按公式：X = C × K（X为血清中碘含量，μg/L；C为由标准曲线查得的或由标准曲线回归方程计算得的所测样品中碘含量，μg/L；K为血清样稀释倍数），计算血清中碘含量。
以0、50、100、150、200、250、300 μg/L的碘标准使用系列溶液，开展6个独立批次的标准溶液碘含量的砷铈催化分光光度法测定，且每批次标准曲线均实行7点定标，根据拟合回归方程，计算标准曲线的相关系数（r）。
与标准曲线同批平行测定标准空白管（0管）10次，将各空白管吸光度值分别代入线性方程，计算出空白管碘含量值，以空白管碘含量值的3倍标准差计算出该方法的最低检测限。
分别取标准曲线含量范围内低、中、高碘含量血清样品3份（高含量血清碘需按要求外加碘酸钾标液预混到所需碘含量），进行6个批次平行测定，计算均值、标准差和变异系数。
①分别取标准曲线范围内低、中、高碘浓度血清样品3份进行加碘标（50 μg/L）进行加标回收试验，本底样测定和加标样测定各为3个平行样，重复测定3次，分别计算均值和回收率。
为考察血清保存条件对碘含量检测的影响，选取血清样品，分装15份，分别采取室温（20 ℃）、冷藏（4 ℃）和冷冻（- 20 ℃）3种方式进行了为期14 d的观察，设定了当天、第2天、第3天、第7天、第14天共5个观察节点，每个观察节点，取出血清样品恢复至室温后摇匀测定。
实验数据使用Excel 2013录入整理。
在0 ~ 300 μg/L范围内，标准曲线的r为- 0.999 7 ~ - 0.999 4，│r│> 0.999 0，表明本方法的标准曲线有很好的线性关系，见表1。
血清碘的标准曲线验证结果（n = 6）
血清碘的标准曲线验证结果（n = 6）
| 碘标准系列(μg/L) | 不同测定批次测定的吸光度值(A) |  ±s | 变异系数(CV,%) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 第1次 | 第2次 | 第3次 | 第4次 | 第5次 | 第6次 | |||
| 0 | 1.540 | 1.563 | 1.608 | 1.536 | 1.558 | 1.581 | 1.564 ± 0.027 | 1.73 |
| 50 | 1.061 | 1.041 | 1.068 | 1.047 | 1.073 | 1.062 | 1.059 ± 0.012 | 1.13 |
| 100 | 0.683 | 0.683 | 0.694 | 0.652 | 0.685 | 0.688 | 0.681 ± 0.015 | 2.20 |
| 150 | 0.434 | 0.413 | 0.452 | 0.420 | 0.425 | 0.422 | 0.428 ± 0.014 | 3.27 |
| 200 | 0.272 | 0.268 | 0.282 | 0.256 | 0.271 | 0.269 | 0.270 ± 0.008 | 2.96 |
| 250 | 0.170 | 0.167 | 0.175 | 0.165 | 0.168 | 0.161 | 0.168 ± 0.005 | 2.98 |
| 300 | 0.107 | 0.110 | 0.108 | 0.102 | 0.103 | 0.106 | 0.106 ± 0.003 | 2.83 |
碘含量均值为4.89 μg/L，标准差为1.71 μg/L，由3倍标准差给出方法最低检测限为5.13 μg/L。空白管测定值见表2。
空白管最低检测限测试结果（n = 10）
空白管最低检测限测试结果（n = 10）
| 空白管测定次数 | 吸光度值(A) | 碘计算值(μg/L) |
|---|---|---|
| 1 | 1.586 | 6.22 |
| 2 | 1.624 | 3.60 |
| 3 | 1.548 | 8.91 |
| 4 | 1.611 | 4.49 |
| 5 | 1.598 | 5.39 |
| 6 | 1.617 | 4.08 |
| 7 | 1.630 | 3.19 |
| 8 | 1.614 | 4.28 |
| 9 | 1.627 | 3.39 |
| 10 | 1.598 | 5.39 |
| 均值 | 1.605 | 4.89 |
低、中、高碘含量样品的变异系数分别为0.89%、1.88%、0.67%，见表3。
血清碘精密度测试结果（n = 3）
血清碘精密度测试结果（n = 3）
| 血清 | 血清碘含量(μg/L) | 不同测定批次测定的血清碘含量(μg/L) |  ±s(μg/L) | 变异系数(CV,%) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 第1次 | 第2次 | 第3次 | 第4次 | 第5次 | 第6次 | ||||
| 低碘 | 40 ~ 80 | 53.92 | 53.36 | 54.11 | 53.92 | 52.70 | 53.85 | 53.64 ± 0.48 | 0.89 |
| 中碘 | 120 ~ 180 | 123.94 | 128.23 | 125.63 | 128.17 | 127.37 | 121.82 | 125.86 ± 2.36 | 1.88 |
| 高碘 | 200 ~ 280 | 269.95 | 274.35 | 272.54 | 272.91 | 275.96 | 273.63 | 273.22 ± 1.84 | 0.67 |
低含量回收率为96.40% ~ 107.04%，中含量回收率为99.18% ~ 100.80%，高含量回收率为93.90% ~ 100.24%，总平均回收率为99.48%，见表4。
低、中、高浓度血清碘加标回收率结果
低、中、高浓度血清碘加标回收率结果
| 血清 | 重复测量次数 | 本底值(μg/L) | 加标浓度(μg/L) | 实测值(μg/L) | 回收率(%) |
|---|---|---|---|---|---|
| 低碘 | 第1次 | 25.89 | 50 | 74.09 | 96.40 |
| 第2次 | 26.33 | 50 | 79.85 | 107.04 | |
| 第3次 | 26.78 | 50 | 78.26 | 102.96 | |
| 均值 | 26.33 | 50 | 77.40 | 102.13 | |
| 中碘 | 第1次 | 125.63 | 50 | 175.22 | 99.18 |
| 第2次 | 127.37 | 50 | 177.77 | 100.80 | |
| 第3次 | 128.17 | 50 | 178.37 | 100.40 | |
| 均值 | 127.06 | 50 | 176.95 | 100.13 | |
| 高碘 | 第1次 | 201.01 | 50 | 251.13 | 100.24 |
| 第2次 | 199.85 | 50 | 247.04 | 94.38 | |
| 第3次 | 199.85 | 50 | 246.80 | 93.90 | |
| 均值 | 200.24 | 50 | 248.32 | 96.17 |
血清中碘含量总体呈下降趋势，变化幅度在- 1.6% ~ 0.5%，见表5。
血清碘的稳定性测定结果
血清碘的稳定性测定结果
| 保存时间 | 保存温度 | 不同测定批次血清碘含量(μg/L) | 变化幅度(%) | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 第1次 | 第2次 | 第3次 | |||
| 第1天 | 室温(20 ℃) | 125.63 | 127.37 | 128.17 | - |
| 第2天 | 室温(20 ℃) | 125.78 | 126.53 | 127.68 | -0.3 |
| 冷藏（4 ℃） | 125.60 | 127.02 | 128.11 | -0.1 | |
| 冷冻(- 20 ℃) | 125.15 | 127.11 | 127.72 | -0.3 | |
| 第3天 | 室温(20 ℃) | 125.11 | 127.25 | 127.53 | -0.3 |
| 冷藏（4 ℃） | 125.25 | 127.30 | 127.61 | -0.3 | |
| 冷冻(- 20 ℃) | 125.13 | 126.43 | 127.25 | -0.6 | |
| 第7天 | 室温(20 ℃) | 123.58 | 125.33 | 128.05 | -1.1 |
| 冷藏（4 ℃） | 124.63 | 125.16 | 126.22 | -0.9 | |
| 冷冻(- 20 ℃) | 126.12 | 125.49 | 126.78 | -0.7 | |
| 第14天 | 室温(20 ℃) | 128.53 | 127.23 | 126.25 | 0.2 |
| 冷藏（4 ℃） | 126.12 | 125.16 | 123.86 | -1.6 | |
| 冷冻(- 20 ℃) | 128.25 | 129.03 | 125.72 | 0.5 | |
注："-"为无数据
本方法采用与尿碘的砷铈催化分光光度法（WS/107.1-2016）检测方法一样的实验原理，相近的操作步骤，在应用上，能具备尿碘检测能力的实验室开展血清碘检测难度不大，本方法使用与尿碘通用的分光光度计，操作难度、运行和维护成本较其他大型仪器设备如ICP-MS要低许多，更有利于在基层普及应用。实验验证结果表明，本方法最低检测下限为5.13 μg/L。同时本方法具有良好的精密度，对3种不同碘浓度尿样重复测定，相对标准差均小于2%，血清样加碘标回收率为93.90% ~ 107.04%，均满足《生物材料中化学物质测定方法》（GBZ/T 210.5-2008）[7]的规定。3种方式保存的血清样品放置14 d后，碘含量衰减率不超过2%，表明血清样品碘含量稳定性适用于本方法。以上验证结果表明，本方法符合生物样品分析要求，适合推广应用。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
