调查产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌对磷霉素的耐药情况及其耐药机制。
收集2014年7月至12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的产ESBL肺炎克雷伯菌79株，琼脂稀释法测定磷霉素最低抑菌浓度(MIC)，参照欧洲抗菌敏感性实验标准(EUCAST)将MIC>32 mg/L作为磷霉素耐药折点。脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株同源性分析，并借助S1核酸酶分析细菌携带质粒的大小和相似性；滤膜接合实验明确质粒对耐药性的传递作用；PCR扩增测序筛查已知的质粒介导磷霉素耐药基因，并分析耐药基因上、下游转座移动元件的结构。
79株产ESBL肺炎克雷伯菌中有9株对磷霉素耐药，耐药率为11.4%。PFGE显示9株耐药菌株均为散发克隆，携带的质粒大小也并无相似性。9株耐药株均携带质粒介导磷霉素耐药基因fosA3，未筛查出携带fosA和fosC2耐药基因的耐药株。耐药菌株所编码的fosA3基因均位于一个双拷贝IS26插入序列中间。
临床产ESBL肺炎克雷伯菌中已出现对磷霉素耐药的菌株，质粒编码fosA3基因介导的磷霉素修饰是磷霉素耐药的主要原因，而插入序列IS26可能造成耐药基因的广泛传播。
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革兰阴性菌的多重耐药问题一直是困扰临床感染治疗的难题，临床比较多见的是产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肠杆菌科细菌的感染。作为治疗大肠埃希菌尿路感染的经典药物，磷霉素目前也成为多重耐药肠杆菌科细菌感染治疗药物的重要选择之一[1,2]。虽然磷霉素在临床上作为抗菌药物已使用几十年，但现在肠杆菌科细菌对磷霉素依然保持较高的敏感性，文献报道大肠埃希菌对磷霉素的耐药率为1.0%～10.2%[3,4,5,6,7,8,9]，而肺炎克雷伯菌对磷霉素的耐药率为5.5%[7]。目前已知的磷霉素耐药机制主要是在大肠埃希菌耐药株的研究中获得的，机制大致可分为染色体介导耐药和质粒介导耐药。染色体介导磷霉素耐药主要是由于染色体上编码的磷霉素结合靶蛋白MurA的氨基酸突变或者该蛋白的过表达造成，而转运蛋白GlpT和UhpT作为磷霉素进入细菌胞内的通道，其氨基酸变异也是耐药形成的重要机制，同时，uhpA、ptsI和cyaA这3个调控基因的变异可以下调两个通道蛋白的表达量，从而也在磷霉素耐药过程中发挥一定的作用[10]。质粒介导耐药机制通常是细菌获得了编码磷霉素修饰酶的质粒，在肠杆菌科细菌中发现的磷霉素修饰酶基因主要有fosA、fosA3、fosC2，它们表达的蛋白可以修饰磷霉素分子从而使其失效[7,8,9]；同时，这些造成耐药的磷霉素修饰酶基因可同质粒一起在菌株间发生水平传播[9]。目前国内关于肺炎克雷伯菌对磷霉素耐药机制的研究较少，本研究通过磷霉素耐药菌株的筛查，明确在临床上常见的产ESBL肺炎克雷伯菌对磷霉素的耐药率，并探究其机制以及耐药基因的传播方式。
