观察褪黑素对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。
组织块法分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),取第4代细胞分成4组:对照组、褪黑素(Melatonin)10-3 mmol/L组、褪黑素受体拮抗剂(Luzindole)1 mmol/L组、Luzindole 1 mmol/L+ Melatonin 10-3 mmol/L组,分组培养48 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR, SYBR Green)检测细胞裂解液CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达;细胞爬片免疫荧光细胞化学方法分析CTGF、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)含量;酶联免疫吸咐试验(ELISA)法检测细胞培养液CTGF、COL-Ⅰ、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)含量。
10-3 mmol/L褪黑素降低增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达及CTGF、COL-Ⅰ的含量(P< 0.05),但COL-Ⅲ没影响。对照组、褪黑素组、Luzindole组、Luzindole+褪黑素组CTGF和α- SMA mRNA分别为0.129 4±0.006 1、0.086 9±0.003 1、0.123 5±0.008 1、0.123 2±0.009 4(F= 30.130,P< 0.01)和0.134 7±0.004 2、0.084 7±0.003 1、0.128 9±0.002 6、0.128 2±0.004 1(F= 168.500,P<0.01);CTGF和COL-I荧光细胞化学相对表达量为0.013 5±0.000 3、0.008 4±0.000 3、0.012 6±0.000 5、0.012 5±0.000 4 (F= 140.750,P< 0.01)和0.012 7±0.000 8、0.008 6±0.000 4、0.012 0±0.000 9、0.012 0± 0.000 8(F= 24.240,P< 0.01);CTGF和COL-I细胞培养液浓度(ng/L)为30.056 9±1.286 9、19.425 4±0.924 5、26.673 8±0.940 5、25.398 0±0.847 8(F=76.490,P< 0.01)和30.044 5± 1.157 5、21.798 5±1.126 0、26.516 8±1.292 3、25.459 4±1.705 7(F=25.650,P< 0.01);COL-Ⅲ细胞培养液浓度(ng/L)为47.141 4±3.532 6、53.498 2±4.589 9、52.532 5±5.239 8、46.427 1± 4.204 2(F=2.680,P<0.01)。
褪黑素通过与受体结合,下调增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达,从而降低CTGF、COL-Ⅰ的含量。
