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miRNA-29c表达异常减少是导致一些恶性肿瘤细胞无限增殖及肿瘤发生、发展的重要因素。Senqupta等[1]采用基因芯片技术研究结果显示微小RNA(miRNA，miR)-29c表达的浓度仅为正常鼻咽上皮细胞的1/5。本研究旨在观察miR-29c在体外对鼻咽癌细胞增殖侵袭能力的影响及体内对肿瘤生长的抑制作用。
人低分化高成瘤鼻咽癌5-8F细胞株购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)，雄性BALB/c裸鼠购自浙江大学医学院实验动物中心(动物检疫合格证号：3700193803)；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司(批号：11668-027)；miR-29c模拟物(miR-29c mimics)及无关序列(NC)由广州锐博生物公司合成。
稳定传代2～3代后，取对数生长期细胞进行后续实验。实验分3组，分别为miR-29c mimics组、NC组、正常空白对照(Mock组)。
参照Invitrogen公司脂质体Lipofectamine™ 2000试剂说明书，将miR-29c模拟物、无关序列NC瞬时转染鼻咽癌5-8F细胞。荧光显微镜下观察大致转染效率并拍照。
按照Trizol说明书提取细胞总RNA，逆转录合成cDNA，行聚合酶链反应。记录各孔循环阈值(Ct)，以U6为内参基因，并采用2－△△Ct法计算miR-29c的相对表达量。
测定3组细胞在450 nm处的吸光度(A)值，A值越高表示活细胞数越多，细胞增殖活性也越高。
Transwell细胞培养小室的上室包被基质胶，24 h后滤膜用甲醛固定，结晶紫染色，于倒置显微镜下观察穿膜至微孔膜下层的细胞。取洗脱液于紫外分光光度计测570 nm处的A值。
将30只BALB/c裸鼠采用完全随机方法分成3组，每组10只。并建立裸鼠皮下成瘤模型，测量皮下移植瘤长径(L)和短径(W)，利用V＝(L×W2)/2公式计算其体积(V)。在接种28 d剥离移植瘤组织测量重量。
应用SPSS 19.0统计软件分析，数据以均数±标准差(
±s)表示，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
用带有Cy3荧光蛋白的无关序列(Cy3-NC)转染5-8F细胞24 h，于荧光显微镜下观察大致转染率，观察到转染效率约为90%。
miR-29c mimics转染后的鼻咽癌5-8F细胞与NC组和Mock组比较，miR-29c的表达量显著增加(F＝102.100，P＝0.000)。
转染miR-29c mimics组5-8F细胞的A值明显低于NC组和Mock组，差异有统计学意义(F＝12.610，P＝0.002)，NC组和Mock组比较A值差异无统计学意义(F＝0.008，P＝0.931)。结果表明，上调miR-29c表达后5-8F细胞的增殖活性受到明显抑制。
miR-29c mimics转染5-8F细胞后，细胞侵袭能力较NC组和Mock组显著降低，差异有统计学意义(F＝36.160，P＝0.000)，NC组和Mock组侵袭能力差异无统计学意义(F＝0.093，P＝0.771)。
mimics组裸鼠体内肿瘤体积和肿瘤重量都显著小于NC组和Mock组(F＝4.358，P＝0.048；F＝4.738，P＝0.039)，NC组和Mock组间肿瘤体积和重量差异无统计学意义(F＝0.082，P＝0.785；F＝0.018，P＝0.899)。
本研究结果显示，Lipofectamin 2000瞬时转染法的转染效率在90%左右，转染后miR-29c的表达量上调了10多倍，表明转染的效果显著。转染miR-29c后5-8F细胞的增殖、侵袭能力受到明显抑制；转染miR-29c组裸鼠移植瘤的体积重量明显低于NC组和Mock组，这表明miR-29c可在体内外显著抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖生长及侵袭能力，并显著降低其致瘤性。本研究结果表明，在鼻咽癌中，miR-29c是一个抑制性miRNA，过表达miR-29c可以显著抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖、侵袭等恶性生物学行为。
