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研究发现具有IQ结构域的GTP激酶活化蛋白1(IQGAP1)过表达与食管鳞状细胞癌的侵袭转移密切相关[1]。本研究旨在探讨具有IQ结构域的三磷酸鸟苷(GTP)激酶活化蛋白1(IQGAP1)在食管鳞状细胞癌组织中的表达及沉默其表达对食管鳞状细胞癌细胞化疗敏感性的影响。
食管鳞状细胞癌细胞株Ec9706购自上海博谷生物公司;RPMI 1640培养液购自美国Gibco公司;顺铂、噻唑蓝(MTT)均购自美国Sigma公司;IQGAP1抗体购自美国Santa Cruz公司;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测试剂盒、脂质体Lipofectamine™2000均购自美国Invitrogen公司。
采用卵白素-生物素-酶复合物(ABC)法,胞质出现棕黄色颗粒为IQGAP1阳性细胞。
构建si-IQGAP1及si-CTRL序列并转染食管癌细胞Ec9706,通过RT-PCR和Western blot验证IQGAP1表达。
将细胞接种96孔板,采用浓度梯度顺铂干预24 h,检测490 nm吸光度值。
碘化丙锭(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)结合PI双染法检测细胞凋亡。
78例癌组织IQGAP1的阳性表达率为88.5%,明显高于癌旁组织的17.9% (P=0.000)。
RT-PCR及Western blot显示,阳性干扰组细胞IQGAP1 mRNA及蛋白表达水平分别为1.20±0.13和0.18±0.05,均较阴性对照组及空白组显著下降(P=0.000、0.002)。
顺铂(1、5、10、20 μmol/L)处理细胞24 h后,阳性转染组的细胞增殖率为(87.02±0.83)%、(46.48±1.52)%、(28.07±3.73)%和(19.82±1.37)%,均明显低于阴性对照组和空白组(P=0.003、0.000、0.001、0.001)。
流式细胞仪检测结果显示阳性干扰组在顺铂处理后G0/G1期细胞比例和凋亡率分别为(69.15±1.92)%和(28.00±1.35)%,均明显高于对照组(P=0.005、0.001)。
本实验结果显示IQGAP1在食管鳞状细胞癌组织中呈高表达,采用RNA干扰技术沉默IQGAP1可促进顺铂对食管鳞状细胞癌细胞Ec9706增殖的抑制,G0/G1期细胞比例和凋亡率显著增加,表明沉默IQGAP1表达可改善细胞对顺铂的抵抗作用,增加药物敏感性。