实验研究
大鼠肺泡上皮细胞自噬对内质网应激的影响
中华实验外科杂志, 2018,35(2) : 281-283. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.02.028
摘要
目的

观察大鼠肺泡上皮细胞CCL149自噬对内质网应激的影响。

方法

将绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)质粒导入CCL149细胞,筛选出稳定表达GFP-LC3的细胞株。在分别加入自噬激活剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,观察大鼠肺泡上皮细胞经缺氧复氧2、4、6 h时细胞自噬变化及相应的内质网应激反应。

结果

在缺氧复氧2、4、6 h这3个时间点,加入3-MA组自噬基因GFP-LC3表达量显著低于对照组(t=6.317,P=0.024;t=8.583,P=0.013;t=6.341,P=0.026),Beclin-1表达量显著低于对照组(t=4.658,P=0.039;t=7.120,P=0.022;t=10.320,P=0.000),p62表达量显著低于对照组(t=5.906,P=0.015;t=7.032,P=0.019;t=7.072,P=0.032),而内质网应激基因免疫球蛋白结合蛋白(BIP)表达量显著高于对照组(t=5.988,P=0.012;t=9.473,P=0.004;t=12.863,P=0.000),X-盒结合蛋白(XBP-1)表达量显著高于对照组(t=4.285,P=0.043;t=9.563,P=0.008;t=10.531,P=0.000),C/EBP同源蛋白(CHOP)表达量显著高于对照组(t=5.477,P=0.031;t=8.373,P=0.016;t=8.954,P=0.025);加入雷帕霉素组自噬基因GFP-LC3表达量显著高于对照组(t=4.502,P=0.046;t=10.000,P=0.010;t=4.983,P=0.041),Beclin-1表达量显著高于对照组(t=5.161,P=0.029;t=5.767,P=0.029;t=9.342,P=0.012),p62表达量显著高于对照组(t=6.687,P=0.026;t=7.084,P=0.016;t=9.767,P=0.000),而内质网应激基因BIP表达量显著低于对照组(t=7.245,P=0.016;t=8.432,P=0.005;t=12.562,P=0.000),XBP-1表达量显著低于对照组(t=6.255,P=0.022;t=8.450,P=0.029;t=8.365,P=0.035),CHOP表达量显著低于对照组(t=7.048,P=0.014;t=11.566,P=0.000;t=10.144,P=0.000)。

结论

在大鼠肺泡上皮细胞缺血缺氧早期,增强细胞自噬可减弱内质网应激。

引用本文: 范涛, 耿庆, 张博友, 等.  大鼠肺泡上皮细胞自噬对内质网应激的影响 [J] . 中华实验外科杂志, 2018, 35(2) : 281-283. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.02.028.
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自噬是细胞内物质成分利用溶酶体被降解过程的统称,它是真核细胞所特有。根据底物进入溶酶体通路的不同可将自噬分为3种类型:大自噬、小自噬和分子伴侣介导的自噬[1]。Beclin-1是启动自噬的关键蛋白,作用于细胞自噬的成核时期,是哺乳动物中第一个被认识并证实与细胞自噬活化直接相关的肿瘤抑制基因[2]。本实验旨在观察大鼠肺泡上皮细胞缺氧复氧自噬对内质网应激的影响。

 
 
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