探讨Notch信号通路在肝癌(HCC)细胞侵袭迁移中的作用机制。
分别用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测肝癌细胞株HepG2和非肿瘤肝细胞株HL-7702中Snail和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达；Western blot检测NICD蛋白的表达；200 pmol小干扰RNA(siRNA)-Snail和5 μmol/L DAPT分别处理HepG2后，RT-PCR和Western blot检测Snail和E-cadherin的mRNA和蛋白表达；Transwell小室检测各处理组细胞的侵袭、迁移能力。
HepG2中Snail mRNA和蛋白的表达均高于非肿瘤肝细胞株HL-7702(0.11±0.06比0.08±0.02、0.46±0.06比0.21±0.04)，差异有统计学意义(P＝0.021、0.032)，E-cadherin mRNA和蛋白的表达低于HL-7702(0.47±0.11比0.83±0.05、0.17±0.03比0.25±0.06)，差异有统计学意义(P＝0.012、0.004)。与siRNA阴性对照组比较，siRNA-Snail组Snail mRNA(0.76±0.13比0.25±0.06，P＝0.031)和蛋白(0.81±0.24比0.27±0.08，P＝0.024)表达显著降低，E-cadherin mRNA(0.33±0.06比0.85±0.18，P＝0.015)和蛋白(0.14±0.02比0.52±0.07，P＝0.031)的表达显著上调，细胞侵袭(93.42±12.33比39.66±8.33，P＝0.011)、迁移(375.66±65.21比98.52±12.76，P＝0.008)能力均明显下降。HepG2中NICD蛋白的表达明显高于HL-7702(0.26±0.04比0.11±0.02)，差异有统计学意义(P＝0.004)。与NT组比较，Notch信号通路特异性γ-分泌酶抑制剂(GSI)抑制剂DAPT能够降低NICD蛋白的表达(0.22±0.05，0.12±0.02，P＝0.020)，说明DAPT能够有效抑制Notch信号通路的活化。DAPT能有效抑制Snail mRNA(0.56±0.08比0.23±0.05，P＝0.004)和蛋白(0.72±0.06比0.27±0.04，P＝0.030)的表达，上调E-cadherin mRNA(0.21±0.03比0.54±0.06，P＝0.011)和蛋白(0.32±0.07比0.77±0.08，P＝0.021)的表达，同时能够抑制肝癌细胞的侵袭(87.33±9.33比32.21±6.63，P＝0.008)、迁移(384.23±43.33比78.31±9.33，P＝0.012)。
Notch信号通路在肝癌侵袭迁移过程中起重要作用，其作用机制是通过调控Snail/E-cadherin来实现的。
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E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种重要的黏附分子，在肿瘤的发生过程中，某些信号转导通路激活后可减少E-cadherin的表达从而导致肿瘤的转移发生。研究表明，E-cadherin的表达减少与肿瘤的侵袭、转移及预后不良密切相关[1]。Snail是一个锌指转录因子，它能与E-cadherin基因上皮细胞钙黏蛋白基因(CDH1)启动子的E-box区相结合，从而抑制E-cadherin的转录过程[2]。Notch信号通路在肿瘤中的作用日益受到重视，其γ-分泌酶抑制剂(GSI)能够抑制γ-分泌酶对Notch受体胞内段(NICD)的蛋白水解作用，从而抑制Notch信号通路的活化[3]，GSI已经用于治疗T淋巴细胞白血病和乳腺癌的临床治疗试验。Notch信号通路参与肝癌的侵袭转移机制尚不明确。我们通过采用Notch信号通路特异性GSI抑制剂DAPT，探讨了Notch信号通路参与肝癌细胞侵袭迁移的分子机制。
