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我们建立兔跟腱急性损伤修复术后功能位固定模型,通过实验观察各组Ⅲ型胶原(COLⅢ)和血小板源性生长因子(PDGF)的含量变化,观察持续温和牵张应力刺激对损伤后跟腱组织愈合的影响。
制作兔跟腱急性损伤模型,A组行功能位踝关节固定,B组行松弛位踝关节固定,C组不进行任何固定,D组为正常对照组,28 d后去除A组和B组动物石膏固定。
(1)将术后第7、14、28天3个时间点的兔跟腱组织取下,制作切片,将标本进行苦味酸1 d狼猩红染色,通过图像分析仪对各组之间Ⅰ型及Ⅲ型胶原纤维在每高倍镜视野下所占面积的百分比进行测定。(2)通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测,记录COLⅢ、PDGF的蛋白量。(3)通过实时定量聚合酶连反应(PCR)实验,检测相关基因的表达。
应用SPSS 20.0统计软件分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
1.天狼猩红染色观察显示:正常组胶原纤维排列整齐,主要为鲜红色的Ⅰ型胶原(COLⅠ),无或有极少量的Ⅲ型绿色纤维。损伤修复7 d时,A、B、C 3组主要以绿色的Ⅲ型胶原为主,C组有部分纤维断裂;14 d时,A、B、C 3组的COLⅢ均逐渐减少,但纤维结构排列紊乱;28 d时,A、B、C 3组COLⅢ基本消失,胶原纤维排列整齐,主要为鲜红色的Ⅰ型纤维。用DJ-801图像分析系统计算,A组COLⅢ的含量最低,C组次之,而B组最高,消失的COLⅢ则重塑为COLⅠ。
2.ELISA检测结果:肌腱组织内COLⅢ在各组跟腱修复早期含量较高,随时间延长其含量逐渐减少。A组较B、C两组COLⅢ含量降低较早,下降较快,D组COLⅢ含量变化不大。肌腱组织内PDGF含量在各组肌腱损伤后修复早期PDGF含量均显著增高,在整个跟腱修复过程中A组较B、C两组PDGF含量较高,且C组高于B组,各组PDGF含量随恢复时间的延长逐渐降低,D组PDGF含量变化不大。
3.PCR实验检测结果,肌腱组织内Ⅲ型胶原、PDGF基因表达量变化趋势与蛋白含量变化趋势基本一致。