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新生大鼠胰腺来源干细胞的分离培养与鉴定
中华实验外科杂志, 2018,35(12)
: 2278-2280. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.12.031
摘要
目的
从新生大鼠胰腺分离出一种胰腺干细胞，并对其进行初步鉴定。
方法
采集大鼠胰腺，5.5 mg/ml Ⅳ型胶原酶消化，用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基培养，首次传代时利用差速贴壁分离上皮样细胞和成纤维样细胞。多次纯化上皮细胞，细胞密度为80%进行传代。对第4代的细胞进行免疫荧光染色，诱导向β胰岛细胞分化并利用高糖刺激胰岛素释放。
结果
新生大鼠胰腺中的胰腺干细胞具有较强的增殖能力，可连续传代。第4代细胞经免疫荧光染色，显示胰十二指肠同源框因子1(PDX-1)、巢蛋白(Nestin)、神经元素3(NGN3)、波形蛋白(Vimentin)、胰岛素(Insulin)和C肽(C-peptide)阳性；经诱导分化后，经双硫腙(DTZ)染色为阳性，同时免疫组织化学显示PDX-1和C-peptide阳性；在糖刺激实验中，当无糖刺激时，细胞组胰岛素释放量为(5.3±1.5) pIU/ml，而诱导后的细胞组胰岛素释放量为(30.0±11.5) pIU/ml，两者比较差异有统计学意义(P＝0.035)。
结论
分离的胰腺细胞是胰腺干细胞。
引用本文:
马步鹏,
刘路路,
林嘉琛,
等.
新生大鼠胰腺来源干细胞的分离培养与鉴定
[J]
. 中华实验外科杂志,2018,35
(12): 2278-2280.
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.12.031
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胰腺干细胞是一类存在于胰腺组织中的成体干细胞，能自我更新，具有多向分化潜能，其特点是在自然分化过程中首先分化为胰腺组织的各种细胞。采用干细胞组织工程技术，体外分离胰腺干细胞作为种子细胞，并诱导其分化为功能性胰岛移植治疗糖尿病，是解决胰岛供体短缺的有效途径。我们用胶原酶消化新生大鼠胰腺组织分离获得胰腺干细胞，探讨其体外生存、增殖及诱导分化特性。
