实验研究
丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在肝癌细胞生物学功能中的作用
中华实验外科杂志, 2019,36(4) : 643-646. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.04.017
摘要
目的

检测丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)在肝癌细胞及正常肝组织中的表达,并探索其对肝癌细胞生物学功能的影响。

方法

通过检测九种肝癌细胞株及正常肝组织STRAP相对表达量,并分别在肝癌细胞株HepG2、SNU449中构建STRAP过表达及敲减细胞株。使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹技术检测细胞株构建后STRAP表达,用Transwell小室及含有基质胶的Transwell小室检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,并使用细胞计数试剂盒(CCK-8)及细胞克隆形成实验检测STRAP对肝癌细胞增殖能力的影响,并利用流式细胞学技术检测STRAP对肝癌细胞凋亡的影响。

结果

肝癌细胞株中STRAP表达水平明显高于正常肝组织;在肝癌细胞中STRAP敲减后,敲减组与对照组mRNA相对表达量分别为(0.17±0.19)、(2.22±1.02),敲减组表达水平明显低于对照组(P<0.05)。过表达STRAP基因后,过表达组与对照组mRNA相对表达量分别为(3.25±0.39)、(1.05±0.37),过表达组明显高于对照组(P<0.01)。STRAP基因敲减后,SNU449细胞克隆形成实验对照组和敲减组细胞克隆数目分别为(221.30±9.60)、(58.30±4.49),迁移实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(0.76±0.04)、(0.44±0.06),侵袭实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(1.11±0.05)、(0.60±0.05),细胞增殖实验敲减组在第72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组下降,细胞凋亡实验对照组和敲减组细胞凋亡比例分别(4.11±0.12)、(11.73±0.40),细胞的克隆形成能力、迁移侵袭能力及增殖能力明显受抑制(P<0.05),细胞凋亡明显增多(P<0.01);SRTAP基因过表达后,HepG2细胞在第48、72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组增多,细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡实验对照组和过表达组细胞凋亡比例分别(8.87±0.12)、(8.34±0.06),细胞凋亡明显受抑制(P<0.05)。

结论

STRAP在肝癌细胞中呈高表达,并且起着促进肝癌细胞增殖、增强肝癌细胞迁移侵袭能力,同时抑制肝癌细胞凋亡的作用。

引用本文: 余细兵, 兰超智, 陈玉冰, 等.  丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在肝癌细胞生物学功能中的作用 [J] . 中华实验外科杂志, 2019, 36(4) : 643-646. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.04.017.
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丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)是相对分子质量为39 000的WD40超家族蛋白之一,最开始发现其生物学功能是能够负性调节经典的转化生长因子-β(TGF-β)/Smad7信号通路,促进细胞增殖的同时抑制细胞凋亡[1],其在多种肿瘤中表达上调,如乳腺癌、肺癌、结直肠癌等,参与调节肿瘤细胞多种生物学功能,促进肿瘤的增殖、侵袭等[2,3,4],其促癌机制绝大部分可能是通过与细胞内其他蛋白质相结合,以蛋白质-蛋白质相互作用的方式发挥其生物学功能[5]。STRAP与肝癌发生发展之间的关系目前报道尚少。本研究通过检测10种肝癌细胞株及肝正常组织中STRAP的表达,随后设计体外实验,分别对SNU449、HepG2两种细胞株的STRAP基因进行沉默与过表达,观察STRAP表达,检测细胞克隆数、增殖凋亡、迁移侵袭能力,探讨STRAP在肝细胞癌中的生物学功能。

 
 
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