骨外科
腺病毒介导的B细胞淋巴瘤/白血病-xL基因修饰骨髓间充质干细胞对大鼠膝关节软骨缺损的修复作用
中华实验外科杂志, 2019,36(11) : 1934-1938. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.11.003
摘要
目的

观察腺病毒介导的B细胞淋巴瘤/白血病-xL(bcl-xL)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠膝关节软骨缺损的修复作用。

方法

构建腺病毒介导的bcl-xL基因过表达载体pAdTrack-bcl-xL,分离大鼠BMSCs并培养扩增,转染pAdTrack-bcl-xL及空白载体,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞bcl-xL表达水平。将50只SD大鼠随机分成5组(n=10),对照组不做任何处理,模型组、BMSCs治疗、转染空载体的BMSCs治疗组和bcl-xL过表达的BMSCs治疗组均制作膝关节软骨缺损模型并在术后3 d进行相应治疗。治疗后6周和12周后处死各组大鼠,采集膝关节,制作石蜡切片,后分别采用苏木精-伊红(HE)、Masson以及番红素-O法对膝关节软骨组织进行染色观察。

结果

与空载体组比较,pAdTrack-bcl-xL组BMSCs中bcl-xL基因在mRNA水平上相对表达量显著增加(1.07±0.08比8.15±0.31,t=-52.893,P<0.01),提示成功构建bcl-xL基因稳定过表达的BMSCs。治疗6周后,与模型组比较,BMSCs组及转染空载体的BMSCs治疗组大鼠膝关节有大量软骨形成、软骨细胞排列趋于整齐、软骨细胞数量明显增加;而与空载体的BMSCs治疗组比较,bcl-xL过表达的BMSCs治疗组大鼠膝关节有更多软骨形成、软骨细胞排列更整齐、软骨细胞数量大大增加。与同组6周时比较,各治疗组大鼠12周时的软骨形成更加明显,尤以bcl-xL过表达的BMSCs治疗组最为突出。

结论

bcl-xL过表达的BMSCs能显著促进大鼠膝关节软骨缺损的修复。

引用本文: 肖凯, 杨林, 高鑫峰, 等.  腺病毒介导的B细胞淋巴瘤/白血病-xL基因修饰骨髓间充质干细胞对大鼠膝关节软骨缺损的修复作用 [J] . 中华实验外科杂志,2019,36 (11): 1934-1938. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.11.003
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目前对于促进分化诱导因子的研究主要涉及细胞因子、软骨分化信号通路的中间分子、非编码RNA等,这些促进分化诱导因子用于骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨分化的研究取得了较为满意的结果[1,2]。B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-xL是线粒体上的跨膜分子,属于bcl-2家族,bcl-xL的经典抗凋亡途径被证明与软骨形成和分化密切相关,例如在骨折模型中使用血管经张素Ⅱ促软骨愈合时发现,bcl-xL的mRNA的表达量明显增高[3],且在软骨细胞异常增生的软骨肉瘤中,也检测出了bcl-xL表达的增加[4]。本研究通过构建bcl-xL过表达的BMSCs来对膝关节软骨缺损大鼠进行治疗,通过病理组织学染色对比治疗前后及不同组别间的治疗效果。

 
 
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