探讨高表达的微小RNA-130b-3p(MiR-130b-3p)参与肾脏损害的可能机制。
肾小管上皮细胞(HK-2)分别转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)、对照mimic(NC mimic)，并给予10 μg/L TGF-β1刺激。实时定量PCR和Western印迹分别检测转染72 h后细胞Ⅳ型胶原蛋白(Collegen Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollegenⅠ)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平；生物信息学预测MiR-130b-3p潜在靶基因，Western印迹检测潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ蛋白表达水平；分别构建含ERBB2IP 3'端非编码区(3'-UTR)和PPARγ 3'-UTR的双荧光素酶报告基因载体，采用双荧光素酶报告基因方法检测靶基因荧光活性。
无刺激转染HK-2细胞后MiR-130b-3p mimic组与NC mimic组比较CollegenⅣ、α-SMA、CollegenⅠ、E-cadherin mRNA和蛋白表达差异均没有统计学意义(均P>0.05)。但在TGF-β1刺激后，与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组Collegen Ⅳ、α-SMA、CollegenⅠmRNA和蛋白表达水平均显著上调，E-cadherin的表达降低(均P<0.05)。与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ mRNA和蛋白表达水平均下调(均P<0.05)；双荧光素酶报告基因结果显示，与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组ERBB2IP荧光素酶活性降低(P<0.01)，而突变(mut)-MiR-130b-3p mimic组无明显变化(P>0.05)；与NC mimic+mut-PPARγ-3'UTR共转染组比较，MiR-130b-3p+mut-PPARγ-3'UTR组PPARγ荧光素酶活性降低，而PPARγ-3'UTR共转染MiR-130b-3p组PPARγ荧光素酶活性比mut-PPARγ-3'UTR共转染MiR-130b-3p组进一步降低，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
MiR-130b-3p通过直接抑制ERBB2IP和PPARγ的表达而促进肾小管上皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化作用，从而参与狼疮肾炎早期肾脏损害。
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系统性红斑狼疮(SLE)是一种全身性自身免疫疾病。狼疮肾炎(lupus nephritis，LN)是SLE最重要的并发症之一，严重影响SLE患者的预后[1]。微小RNA(microRNA，miRNA)主要调控转录后基因水平，血液中的miRNA，也称为循环miRNA，主要存在于微囊泡(microvesicle，MV)中。MV能够抵抗煮沸、反复冻融、极端pH酸碱环境及血清RNA酶的影响，同时也是一种细胞间信号转导载体，可以向靶细胞传递各种信号物质，如mRNA、miRNA等，从而参与细胞的各种生命活动[2,3]。Cantaluppi等[4]将内皮祖细胞(EPC)来源的MV通过尾静脉注入缺血再灌注模型大鼠后，发现这些MV可归巢到受损肾小球及肾小管，并抑制肾小管上皮细胞凋亡和促进血管生成，同时发挥抗肾脏纤维化、肾小球硬化的作用。这项研究结果提示，循环miRNA可以进入靶细胞，甚至进入肾小管上皮细胞并调节其生物学功能。前期研究我们发现LN患者血清中存在MiR-130b-3p异常升高，并与肾脏损害有关。本研究拟以人肾小管上皮细胞株(HK-2)为研究对象，通过转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)，探讨高表达MiR-130b-3p在肾脏损伤中作用的分子生物学机制。
