观察氟非尼酮（AKF-PD）对糖尿病肾病模型db/db小鼠的疗效，并初步探讨其可能的作用机制。
（1）14只野生型8周龄小鼠为正常对照组。42只8周龄db/db小鼠采用完全随机的方法分为模型组、AKF-PD（250 mg·kg-1·d-1）治疗组及氯沙坦（20 mg·kg-1·d-1）治疗组，每组14只，雌雄各半。从10周龄起治疗组分别给予相应剂量的药物连续灌胃18周，正常组及模型组给予等量药物溶媒（0.5%羧甲基纤维素钠）灌胃。尾静脉采血测血糖，ELISA测定24 h尿白蛋白量，PAS染色观察各组小鼠肾脏组织病理改变，免疫组织化学检测Ⅳ型胶原及纤连蛋白（FN）在肾组织的表达。（2）体外培养小鼠肾小球系膜细胞（MES-13），分为正常糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高渗组（5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇）、高糖组（25.0 mmol/L葡萄糖）、AKF-PD组（25.0 mmol/L葡萄糖+400 mg/L AKF-PD）及氯沙坦组（25.0 mmol/L葡萄糖+2 μmol/L氯沙坦）。药物作用72 h后，实时定量PCR检测细胞Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达，ELISA检测细胞培养液上清中的TGF-β1蛋白含量。
（1）与野生型小鼠比较，db/db小鼠体型肥胖，血糖明显升高，伴有大量白蛋白尿，发生肾小球肥大、系膜区扩张等病理改变，肾小球硬化指数升高（P<0.01），肾组织Ⅳ型胶原和FN表达均增加（均P<0.01）；与db/db小鼠比较，AKF-PD及氯沙坦治疗组小鼠24 h尿白蛋白量降低（均P<0.01），肾小球肥大及系膜区扩张减轻，肾小球硬化指数降低（均P<0.01），肾组织中Ⅳ型胶原及FN的表达减少（均P<0.01）。（2）与正常糖组比较，高糖组小鼠肾小球系膜细胞Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均升高（均P<0.01）。与高糖组比较，AKF-PD组、氯沙坦组小鼠肾小球系膜细胞Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达，及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均降低（均P<0.05）。
AKF-PD可能通过作用于肾小球系膜细胞，减少TGF-β1的表达，减少胶原合成，从而抑制db/db小鼠肾纤维化。
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糖尿病肾病（diabetic kidney disease，DKD）是糖尿病患者主要的微血管并发症之一，是导致终末期肾脏病（end stage renal disease，ESRD）的主要原因[1]。在糖尿病状态下，高糖等因素可激活肾小球系膜细胞，使其大量分泌Ⅰ、Ⅳ型胶原及纤连蛋白（fibronectin，FN），引起肾小球基底膜增厚及系膜基质增生，最终导致肾小球硬化[2,3]。转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）是目前已知的能促进肾小球硬化的主要细胞因子[4]。多项研究表明高糖可以诱导肾小球系膜细胞合成及分泌大量TGF-β1，从而促进DKD的发展[5,6]。目前临床上仍缺乏有效治疗DKD的方法，氯沙坦（losartan）是血管紧张素Ⅱ的1型受体拮抗剂，在DKD患者及动物模型中均表现出良好的疗效[7,8]，但其可引起肾素代偿性升高，从而造成肾脏和心血管损伤[7,9]。氟非尼酮（fluorofenidone，AKF-PD）是本课题组自主研发的一类吡啶酮类化合物（专利号：CN02114190），其在肝、肾、肺等多个纤维化动物模型中均能抑制纤维化[10,11,12]，但AKF-PD在DKD动物模型中的作用及其机制仍需进一步研究。db/db小鼠4号染色体上的瘦素基因突变而导致2型糖尿病，其DKD的发病过程与人类相似，是应用最为广泛的DKD动物模型[13]。根据以上理论依据及研究基础，本研究拟采用氯沙坦作为阳性对照药物，观察DKD模型db/db小鼠体内AKF-PD的作用，同时探讨在小鼠肾小球系膜细胞中AKF-PD的作用机制。
