探讨皮层神经细胞在创伤性脑损伤合并放射复合伤(TRI)后自噬相关蛋白表达及意义。
58只SD雄性成年大鼠按随机数字表法分为假手术组(15只)、单纯创伤性脑损伤(TBI)组(15只)、单纯放射性脑损伤(RBI)组(14只)和TRI组(14只)。TBI组为通过液压致侧方液压皮层损伤；RBI组接受60Co全身单次4.5 Gy照射；TRI组皮层液压损伤模型制备成功后30 min内接受60Co全身单次4.5 Gy照射。各组模型制备成功后6周采用HE染色检测皮层神经细胞损伤情况；Western blot印迹法检测微管相关蛋白1轻链3–Ⅱ(LC3–Ⅱ)及自噬相关蛋白Beclin–1的表达。
TBI组损伤区皮层神经细胞数目为(68.7±7.8)个，较假手术组(96.9±9.6)个减少(P<0.05)。TBI组出现较明显核固缩和溶解，无明显空泡，LC3–Ⅱ表达增加(P<0.05)。RBI组神经细胞数目为(59.3±7.4)个，较假手术组减少(P<0.05)，与TBI组差异无统计学意义(P>0.05)。RBI组神经细胞无空泡变性，核固缩、溶解不明显。与假手术组、TBI组比较，RBI组Beclin–1和LC3–Ⅱ明显增加(P<0.01)。TRI组神经细胞数目为(45.8±7.8)个较TBI、RBI组明显减少(P<0.05)，且空泡变性增多，胞核固缩、溶解明显，LC3–Ⅱ与Beclin–1表达量明显下降(P<0.01)。
TBI及RBI后，损伤区皮层自噬水平提高，而当TBI合并RBI后，损伤"叠加"，皮层神经细胞自噬水平明显下降，伴随细胞变性死亡增加，提示自噬在脑损伤中起保护作用。
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自噬是不同于凋亡的Ⅱ型程序性死亡方式[1]，它在神经元中起清除和再利用细胞成分作用，并参与多种病理生理过程。其中大自噬是脑损伤研究最主要的自噬形式，笔者称自噬。虽然自噬现象发现较早，但对于自噬与脑损伤关系研究时间并不长，最早通过脑缺血性损伤发现[2]。自噬的调控机制较复杂，它主要通过雷帕霉素靶蛋白复合物mTORC1调控[3]。其中微管相关蛋白1轻链3(LC3)与自噬相关蛋白(Beclin–1)为重要自噬检测指标。LC3蛋白主要参与前自噬体的延长和包绕[4]，即自噬体后期形成的过程。LC3合成后，被自噬相关基因(Atg4)加工生成LC3–Ⅰ。当自噬激活时，在泛素化样反应酶的作用下LC3–Ⅰ与磷脂酰乙醇胺(PE)偶联生成LC3–Ⅱ[5]，而LC3–Ⅱ为检测自噬水平标志性蛋白；Beclin–1是Atg6同源表达产物，与磷脂酰肌醇三激酶(PI3K)形成复合物，是自噬蛋白基因参与自噬过程的必需成分，与早期自噬体形成有关[6]。故笔者通过检测LC3–Ⅱ与Beclin–1的表达观察各组自噬水平。目前自噬在创伤性脑损伤(traumatic brain injury，TBI)中作用越来越引起关注，两者存在密切关系。随着世界范围内核事故及自然灾害的发生，TBI往往合并放射性脑损伤(radiation–induced brain injury，RBI)，且伴随高致病率及致死率，但相关研究却很少。因此，笔者通过制备创伤性脑损伤合并放射复合伤(trauma combined with radiation injury of brain, TRI)动物模型，检测LC3–Ⅱ和Beclin–1水平变化，初步探讨自噬在复合型脑损伤后的表达及意义。
