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孕妇血浆宽热振幅抗-HI复合抗体检测
国际输血及血液学杂志, 2019,42(5) : 425-428. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-419X.2019.05.010
摘要
目的

探讨宽热振幅抗-HI复合抗体的鉴定及其特征。

方法

选择2017年3月因产前检查不规则抗体筛查结果呈阳性，于大连市血液中心血型室进行不规则抗体特异性鉴定的1例孕妇为研究对象。该例孕妇年龄为27岁，孕龄为37孕周，血型为AB型RhD阳性，既往经剖宫产育有一存活子女，无输血治疗史。采集孕妇及其丈夫肘正中静脉血各5 mL，用于血型鉴定、直接抗人球蛋白试验，以及不规则抗体筛查和鉴定。直接抗人球蛋白试验采用试管法；血型鉴定、免疫球蛋白(Ig)M性质不规则抗体筛查和鉴定，均采用盐水试管法。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，并与受试者签署临床研究知情同意书。

结果

①本例孕妇的ABO血型正定型为A1B型，反定型A细胞为阴性，B细胞弱凝集，O细胞凝集强度为2＋。其ABO血型的正、反定型不符，并且存在不规则抗体。②本例孕妇直接抗人球蛋白试验结果显示，抗IgG和抗C3d均呈阴性。③本例孕妇不规则抗体筛查与鉴定结果显示，其血浆中存在IgM性质宽热振幅抗-HI复合抗体。

结论

对于携带宽热振幅抗-HI复合抗体的患者，应采用多种方法及试剂，对其复合抗体进行筛查和鉴定。以避免此类患者输注ABO不匹配红细胞。

引用本文: 邵林楠, 宋文倩, 王霓, 等.  孕妇血浆宽热振幅抗-HI复合抗体检测 [J] . 国际输血及血液学杂志,2019,42 (5): 425-428. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-419X.2019.05.010
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复合抗体是一种能与≥2种抗原的相互作用产物(复合抗原)反应，但是不能与仅含其中1种抗原的红细胞反应的抗体[1]，其不是≥2种抗体的简单混合物，不应与混合抗体的概念混淆。复合抗体多发现于Rh血型系统中，常见的复合抗体包括：抗-ce(抗-f、抗-RH6)，抗-Ce(抗-RH7)，抗-CE(抗-RH22)和抗-cE(抗-RH27)4类[2,3]，而其他种类的复合抗体则相对少见。抗-HI(抗-IH)复合抗体为完全抗体，于37 ℃环境无活性，因此一般情况下不引起溶血反应，亦无临床意义。热振幅是指抗体在血清学检测中和(或)体外表现出活性的温度范围。宽热振幅抗-HI可能引起急性[4]或延迟性[5]溶血反应，亦可能导致受血者死亡，因此其具有重要临床意义。本研究通过对1例孕妇携带的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)M性质宽热振幅抗-HI复合抗体的鉴定及其特征分析，旨在保障宽热振幅抗-HI复合抗体携带者的输血安全。现将研究结果报道如下。

1　资料与方法
1.1　研究对象

选择2017年3月因产前检查不规则抗体筛查结果呈阳性，遂于大连市血液中心血型室进行不规则抗体特异性鉴定的1例孕妇为研究对象。该例孕妇年龄为27岁，孕龄为37孕周，血型为AB型RhD阳性，既往经剖腹产育有一存活子女，无输血史。本例孕妇于2017年3月上旬，大连市妇幼保健院进行产前检查时，不规则抗体筛查结果呈阳性；因2017年3月下旬拟行剖宫产手术，手术过程中可能会接受输血治疗，被推荐至本血液中心进行不规则抗体特异性鉴定。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》的要求，并且与受试者签署临床研究知情同意书。

1.2　方法
1.2.1　主要试剂与仪器

单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂(批号：20151106，长春博德生物科技有限责任公司)，人ABO反定型用红细胞试剂盒(批号：2017013002，北京金豪制药股份有限公司)，单克隆RhD(IgM)血型定型试剂(批号：20151812，上海血液生物医药公司)，抗人球蛋白(抗IgG，抗C3d)检测试剂盒(批号：20165002，上海血液生物医药公司)，Makropanal 16谱细胞(批号：8000236600，荷兰Sanquin公司)，2-巯基乙醇(批号：20160101，长春博德生物科技有限责任公司)。以上试剂均在有效期内。A2型红细胞、B型脐血红细胞(Bicord)、O型脐血红细胞(Oicord)为本实验室收集自制(批号：SJ20170203001、SJ20170203002、SJ20170203003；A2型红细胞来自健康的献血者；脐带血来自本研究检测当日出生的新生儿；全血/脐带血经生理盐水洗涤3次后，配制成2%～5%的红细胞悬液，并且仅限配制当日使用)。KA-2200型离心机(日本久保田公司)，DK-600A型水浴箱(上海一恒仪器公司)。

1.2.2　实验室检测方法

于孕妇及其丈夫肘正中静脉采集外周全血各5 mL，于乙二胺四乙酸抗凝管中保存，待检。本例孕妇及其丈夫的血型鉴定采用盐水试管法。本例孕妇的直接抗人球蛋白试验采用试管法；其IgM性质不规则抗体筛查和鉴定采用盐水试管法。上述实验操作均严格按照文献[6]方法，以及试剂和仪器说明书进行。

2　结果
2.1　血型鉴定结果

本例孕妇的ABO血型正定型为A1B型，室温条件下反定型A细胞为阴性，B细胞呈弱凝集，O细胞的凝集强度为2＋。其ABO血型的正、反定型结果不符，并且存在不规则抗体。其丈夫ABO血型为B型，Rh血型为RhD阳性。本例孕妇及其丈夫的ABO血型正、反定型结果，见表1。

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表1

本例孕妇及其丈夫ABO血型的正、反定型结果

表1

本例孕妇及其丈夫ABO血型的正、反定型结果

受试者反应条件正定型反定型
抗-A抗-B抗-DA1细胞B细胞O细胞A2型红细胞O型脐血红细胞B型脐血红细胞
丈夫室温－4＋4＋4＋－－NTNTNT
孕妇室温4＋4＋4＋－w＋2＋2＋－－
 4 ℃NTNTNT1＋1＋4＋3＋NTNT
 37 ℃NTNTNT－－w＋－NTNT

注："－"表示未发生凝集，反应呈阴性；"w＋"表示弱凝集；"1＋～4＋"表示凝集强度由弱至强；NT表示未检测。A1细胞、B细胞、O细胞为试剂红细胞

2.2　直接抗人球蛋白试验结果

本例孕妇直接抗人球蛋白试验结果如下。其血清抗IgG和抗C3d均呈阴性。

2.3　不规则抗体筛查与鉴定结果

本例孕妇血浆与谱细胞反应格局显示，室温条件下呈现多凝集状态，凝集强度均为2＋；37 ℃条件下均为弱凝集。室温条件下，本例孕妇血浆与A2细胞反应的凝集强度为2＋，但是不与O型和B型脐带血红细胞反应(表1)，符合抗-HI的特异性反应格局，表明抗体为宽热振幅抗-HI。本例孕妇血浆与谱细胞在盐水介质下的反应格局，见表2。

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表2

本例孕妇血浆与谱细胞在盐水介质下的反应格局

表2

本例孕妇血浆与谱细胞在盐水介质下的反应格局

反应条件谱细胞
12345678910111213141516
室温2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋2＋
37 ℃w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋w＋

注："w＋"表示弱凝集，"2＋"表示中等凝集强度

3　讨论

抗-HI为复合抗体，仅在I和H抗原同时存在时才能致敏红细胞。ABH和Ii抗原之间存在生化联系，Ii决定簇构建ABH抗原的内部结构，I抗原首先添加1个岩藻糖构建H抗原，H抗原再添加1个N-乙酰基半乳糖或D-半乳糖分别构建A或B抗原[5]。与抗-H类似，抗-HI与O型红细胞表面抗原反应最强，因为O型红细胞表面H抗原表达量最高，与A1B型红细胞反应最弱，因为A1B型红细胞表面H抗原表达量最低[5,7]。因为脐血红细胞表面I抗原表达量甚微[8,9,10]，所以为了消除由于抗-HI造成的ABO血型正、反定型不符现象，可以采用脐血红细胞进行反定型试验。本研究采用脐血红细胞进行反定型追加试验，反定型追加试验结果与正定型结果的正、反定型相符，确定本例孕妇血型为AB型。

抗-HI与红细胞的反应性一般较弱，主要在低温条件下反应，多发现于A1型或A1B型个体血浆中[11]。抗-H与抗-HI最明显的区别在于，抗-H与O型脐血红细胞、O型成年个体i抗原阳性红细胞及O型成年个体I抗原阳性红细胞均反应强烈；而抗-HI仅与O型成年个体I抗原阳性红细胞反应强烈，与O型脐血红细胞、O型成年个体i抗原阳性红细胞不发生反应。抗-HI通常被认为是无临床意义的冷抗体。然而研究结果证实，宽热振幅抗-HI有临床意义，可能引起急性或延迟性溶血反应[4,5,12,13,14]。因此，若在患者血浆检出存在或者曾经存在抗-HI，输血时则应使用ABO同型的红细胞进行输注，注意避免给A1型患者输注O型或A2型红细胞，B型患者输注O型红细胞，以及A1B型患者输注O型或A2B型红细胞。

本研究采用2-巯基乙醇对研究对象血浆进行处理后，在盐水和抗人球蛋白介质下与谱细胞均未观察到凝集现象，提示仅存在IgM性质的不规则抗体。孕妇血浆与7个随机选择的A1B型红细胞进行交叉配血试验，在盐水和抗人球蛋白介质下配血均相合。本例孕妇携带有的抗-HI属于较罕见的IgM性质宽热振幅抗体，在37 ℃盐水环境下与O型红细胞反应呈弱凝集现象，若该例孕妇输注了O型红细胞则可能发生溶血反应等危险。Ibanez等[5]报道了2例携带抗-HI的B型RhD阳性镰状细胞性贫血症女性患者，输注2 U O型RhD阳性红细胞后发生迟发性溶血性输血反应，并且导致其中1例患者死亡。Darabi等[4]报道了1例携带抗-HI的56岁A型RhD阴性胃肠道出血男性患者，由于输注了A2型RhD阴性红细胞而发生急性溶血性输血反应。幸运的是，本例孕妇剖宫产手术顺利，没有接受输血治疗，新生儿健康。

综上所述，携带抗-HI的患者输血时，应使用ABO同型的红细胞进行输注。对于抗-HI造成ABO血型正、反定型不符的情况，可以通过用脐带血红细胞进行反定型试验。同时，抗-HI的存在可能影响其他同种抗体的检测[15]，应给予重视。

利益冲突

利益冲突　所有作者均声明不存在利益冲突

4　参考文献
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