分析Prader-Willi综合征(PWS)患儿的临床特征及分子诊断方法，以提高儿科医师对本病的认识。
收集白求恩国际和平医院新生儿科存在肌张力低、喂养困难，生长发育过程中不明原因的发育延迟、身材矮小、肥胖等特征怀疑为PWS的4例患儿，采用临床结合多重连接探针扩增技术(MLPA)对P245和ME028进行序贯检测。
共送检4例，其中婴幼儿期3例，新生儿期1例；男2例，女2例；以运动发育迟缓为主要表现2例，以出生后哭声差为主要表现1例，以走路不稳为主要表现1例；检测出缺失型患儿3例，另1例临床疑似患儿经ME028检测阴性。
新生儿期无明显诱因存在喂养困难、肌张力低等表现，发育过程中有不同程度的运动智力发育落后表现的婴幼儿需考虑PWS，进一步通过MLPA检测P245结合临床辨析及ME028补充检测，可以实现该病的快速诊断，对PWS的临床诊疗有积极意义。
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Prader-Willi综合征(PWS)是最早由Prader等在1956年首次描述的遗传性疾病，临床表现复杂，存在多系统异常，随着生长发育可相继出现新生儿肌张力低、喂养困难、发育延迟、身材矮小、行为异常、儿童期肥胖、下丘脑性发育不良等特征[1]。PWS发病率约为1/15 000，基因定位于15号染色体15q11-13区域[2]，发病原因是该区域父源的印记基因表达缺失，若该区域母源印记基因表达缺失则表现为天使综合征(AS)。普通染色体核型分析常无法做出判断，确诊主要依赖于分子诊断技术[3]。该病分子诊断技术种类多，诊断费用和诊断范围差别较大，探索适合临床一线实际应用的快速、廉价、高效方法，是提高本病诊疗的关键所在。白求恩国际和平医院通过多重连接探针扩增技术(MLPA)和临床分析相结合方法，确诊3例PWS患儿并排除1例疑似患儿，现报告如下，以提高对其认识。
对白求恩国际和平医院新生儿科新生儿病区及小儿康复病区2014年1月至2015年12月高度疑似PWS的4例患儿抽静脉血1 mL，使用厦门致善生物科技股份有限公司的Lab-Aid 820核酸提取仪及配套的mini试剂盒提取DNA。本研究通过医院医学伦理委员会批准，患儿家长均知情同意。
例1，女，6岁，以语言、运动发育落后为主诉就诊于新生儿科康复门诊。出生史无异常，家长诉患儿新生儿期存在喂养困难，3岁时患儿无明显诱因突然出现食欲亢进，饥饿感强，进食次数增多，体质量骤增。4岁时吐字不清楚，发音不正确，语言训练师评估"构音障碍"，因患儿语言训练不配合，建议家长自行回家训练。1年后患儿再次就诊，仍发音不标准，吐字不清，不会单足跳，以"精神运动发育迟缓"于新生儿科康复病区进行康复训练。查体：体质量35 kg，身高105.5 cm，反应好，营养状态偏胖，皮肤白，前额高，毛发黄，双眉淡，杏仁眼，小阴唇，余查体无明显异常。神经系统查体：能与人简单交流，发音不准，吐字不清，不会算数、指认卡片，不能流利说出正确名称。临床诊断PWS，入院后于遗传中心行MLPA检查，结果(图1)证实临床诊断。
P245 results of case 1
P245 results of case 1
例2，女，1岁1个月，以运动发育迟缓为主诉就诊于康复门诊。患儿新生儿期因"新生儿呼吸窘迫综合征、早产儿"于当地医院住院治疗26 d，出院时存在肌张力低下、喂养困难。出生6个月余就诊于新生儿科康复门诊，因"运动发育迟缓"于小儿康复病区进行康复训练。查体：体质量4.3 kg，身高58.5 cm，营养状态中下，刺激反应低下，杏仁眼，口腔小，小下颌，小阴唇，余查体未见阳性体征。神经系统查体：视听追踪差，四肢肌张力低，俯卧位不能抬头，拉起位头极度后仰，竖头差，对折坐，站立位不能承重。头颅超声、MRI正常。临床诊断PWS，入院后行MLPA检查，结果(图2)证实临床诊断。
P245 results of case 2
P245 results of case 2
例3，男，5 h，以出生后哭声弱为主诉入院。第1胎，第1产，足月剖宫产，胎膜早破7 h，羊水粪染，出生后因刺激反应差、哭声弱以"宫内窘迫"收入新生儿科治疗。入院查体：呼吸60次/min，血氧饱和度90%，头围34 cm，体质量3.2 kg，身长54 cm，足月儿貌，刺激反应低下，哭声弱，四肢自主活动少，肌张力低下。病情平稳后给予开奶，吃奶差，不能完成奶量。查甲状腺功能正常，头颅MRI：右侧基底核区腔隙性脑软化灶，右侧顶枕叶弥散异常，考虑新发脑梗死，给予相应营养脑细胞治疗。初步诊断：可疑PWS，随行MLPA检查，结果(图3)证实临床诊断。
P245 results of case 3
P245 results of case 3
例4，男，8岁，以走路不稳3年为主诉入院。第1胎，第1产，足月顺产，新生儿期存在喂养困难。2岁时走路不稳、上楼梯困难，5岁时走路姿势异常就诊于河北省儿童医院，查头颅MRI、肌电图正常。现患儿8岁仍走路不稳，入院行"0～6岁儿童神经心理发育量表"评估：患儿智龄30.3个月，发育商53分，低智能，以"运动协调障碍"收入新生儿科治疗。查体：体质量38 kg，身高132 cm，营养良好，心肺腹查体未见阳性体征。神经查体：注意力不集中，不能完全指令，不能指认不同，不会搭桥，不能正确指认物体，构音障碍，握笔差，会走，不会跳、单腿站，双侧膝腱反射未引出。染色体核型分析正常，临床可疑患儿有染色体微缺失。行MLPA检查，第1次检测结果为PWS疑似病例，P245阴性后检测ME028仍然阴性结果(图4)(甲基化比例正常)，最终认为该患者PWS的可能性很小。
ME028 retested result after testing result negative by P245 of case 4 was still negative (methylation proportion was normal)
ME028 retested result after testing result negative by P245 of case 4 was still negative (methylation proportion was normal)
初检使用荷兰MRC－Holland公司生产的染色体微缺失P245试剂盒检测未获得阳性结果的高度疑似患者，复检使用荷兰MRC－Holland公司生产的甲基化ME028试剂盒，该试剂盒专门用于PWS/AS检测，可分别进行拷贝数检测和甲基化检测。共检测出缺失型患者3例，另1例临床疑似患者经ME028检测阴性。否认发病家族史，患儿及父母染色体核型未见异常(400条带)，排除不平衡易位致病可能。
PWS是最早明确与基因组印记异常有关的微结构异常染色体疾病，遗传类型包括父源性15q11.2-q13区域片段缺失(80%)，母源性15号染色体同源二倍体(20%～30%)和印记中心微缺失及突变(1%～3%)[4]。基因片段的缺失或突变导致相应的多肽表达受阻，尤其在下丘脑区，导致该区域功能障碍。PWS临床表现多样化，随年龄增长在不同年龄阶段有相应表现，诊断该病主要依靠临床诊断与分子遗传学诊断。
我国现该类研究较少，临床诊断主要参照国际标准，目前国际通行的PWS临床诊断标准为Holm等[5]1993年提出的诊断标准，2012年Cassidy等[6]修正后的标准，包括6条主要标准和11条次要标准：主要标准1.0分/项，次要标准0.5分/项。年龄<3岁总评分5分以上，主要诊断标准达4分即可诊断；年龄≥3岁总评分8岁以上，主要诊断标准达5分即可诊断[4]。本组资料中4例患儿，总评分达到诊断标准；本组例4患儿之所以考虑PWS是因其临床存在新生儿和婴儿期肌张力低下，吸吮力差；婴儿期喂养；发育迟缓，智力障碍；语言清晰度异常等表现。
本研究选择MLPA P245试剂盒进行初筛，该试剂盒包含21种常见染色体微缺失检测，而这些疾病(包括PWS/AS)早期症状并不特异，在PWS致病基因区域发生基因"缺失"，能判断70%的PWS和AS，而PWS和AS的进一步区分可以依赖临床症状辨析。对于P245未发现缺失，但临床症状仍倾向父源单亲二体(UPD)的PWS/AS患者，可通过甲基化特异性MLPA ME028检测，本研究采用的是将同一样品酶切与非酶切直接比较的办法计算甲基化比例，如果印迹基因比例为50%，则说明甲基化正常。如果出现异常则可以准确区分UPD类型或印迹基因缺陷[7]，当然也可以判断更大范围的基因缺失或者区分缺失型PWS/AS。这个策略可以诊断25%的PWS。二者结合可以诊断95%以上的PWS。
