实验研究
探索蛋白酶体抑制剂MG-132对小鼠早期胚胎发育的影响
中华生殖与避孕杂志, 2018,38(5) : 386-392. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2096-2916.2018.05.008
摘要
目的

探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对小鼠早期胚胎发育细胞周期的影响。

方法

通过体外受精的方法,分别收集受精后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、84 h、96 h的胚胎(12 hpi、24 hpi、36 hpi、48 hpi、60 hpi、72 hpi、84 hpi、96 hpi),通过Western Blotting验证在检测12 hpi时总蛋白泛素化水平最高,以此为基准设置不同浓度以及时间梯度,确定MG-132引起2-细胞发育阻滞和延迟的最适浓度和处理时间,最终确定MG-132浓度1 μmol/L,在14~18 hpi作用4 h可以引起2-细胞发育阻滞和延迟。通过Edu检测、免疫荧光实验,观察分析MG-132是否会引起早期胚胎发育细胞周期改变。

结果

用1 μmol/L MG-132,在14~18 hpi处理4 h可以引起早期胚胎发育细胞周期延迟。

结论

MG-132作为泛素-蛋白酶体抑制剂,可以抑制胚胎发育中蛋白质的降解,引起早期胚胎发育细胞周期进程受抑,致使胚胎发育阻滞在G2/M期。

引用本文: 雷洋洋, 李明芮, 周帅, 等.  探索蛋白酶体抑制剂MG-132对小鼠早期胚胎发育的影响 [J] . 中华生殖与避孕杂志, 2018, 38(5) : 386-392. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2096-2916.2018.05.008.
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胚胎的早期发育过程依赖于卵母细胞在生长及成熟过程中累积的mRNA和蛋白质,此时的各种调控为母源性调控[1],母源性mRNA和蛋白质对于早期胚胎发育中转录因子的正确调控过程至关重要,其中母源mRNA对指导早期胚胎特性和种属延续具有核心作用,它们可能参与到表观遗传修饰、胚胎基因组的转录激活、胚胎的致密化和胚胎极性建立等过程,在卵子受精后,母源物质开始逐渐消耗,胚胎发育速度减缓,这时需要胚胎自身合成生长发育所需要的物质,所以必须激活合子基因组,即为合子基因组激活(ZGA),从母源物质的降解一直到胚胎基因组的激活,这个过程被称为母本到胚胎的转变(maternal-to-zygotic transition,MZT),MZT在多种生物中普遍存在[2]。此时胚胎逐渐由母源调控转为合子调控,在经过一段时间两者皆起作用的调控过渡阶段,母型调控能力减弱、消失,最终完全由合子基因组控制各个部分和各个发育阶段的发展[3]。如果母源物质不能及时降解,将会造成胚胎发育障碍,胚胎形态畸形等。

 
 
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