临床研究
冻融胚胎移植活产结局的相关因素分析
中华医学杂志, 2021,101(32) : 2552-2558. DOI: 10.3760/cma.j.cn112137-20210318-00684
摘要
目的

分析冻融胚胎移植(FET)周期活产结局的相关因素。

方法

以2017年1月至2020年3月广东省中医院生殖医学中心563对夫妻为研究对象,共获取736个FET周期,分析其活产结局,比较活产组和非活产组患者的妊娠结局、妊娠并发症和胚胎情况,通过多因素logistic回归模型评估15个候选因素与活产结局的关系,以确定FET活产的独立相关因素。

结果

纳入患者的男性取精年龄为(33±5)岁,女性取卵年龄为(31±4)岁,女性移植年龄为(32±4)岁,不孕年限为(3.5±2.6)年。736个FET周期中有333个(45.2%)活产周期,403个(54.8%)非活产周期。活产组中发生妊娠期并发症者49例(14.7%)。活产组女性移植年龄、女性取卵年龄及男性取精年龄均小于非活产组[(31±4)岁比(32±4)岁,(30±4)岁比(32±4)岁,(33±4)岁比(34±5)岁],活产组不孕年限较非活产组短[(3.2±2.2)年比(3.6±2.8)年],活产组原发性不孕的患者比例较非活产组高[(63.1%,210例)比(49.6%,200例)],以上差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素分析显示,女性移植年龄[OR值(95% CI)为0.50(0.27~0.92),P=0.026]、不孕类型[OR值(95% CI)为0.62(0.43~0.88),P=0.008]、移植优胚个数[OR值(95% CI)为1.60(1.11~2.31),P=0.012]以及移植胚胎类型[OR值(95% CI)为2.43(1.46~4.01),P=0.001]是FET活产的相关因素。

结论

女性移植年龄、不孕类型、移植优胚数、移植胚胎类型是FET活产结局的相关因素。

引用本文: 卢双儿, 徐珉, 陆杉, 等.  冻融胚胎移植活产结局的相关因素分析 [J] . 中华医学杂志, 2021, 101(32) : 2552-2558. DOI: 10.3760/cma.j.cn112137-20210318-00684.
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近年来随着胚胎冷冻技术水平的提高,冻融胚胎移植(FET)已广泛应用于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术中。多个研究结果显示FET周期能获得与新鲜移植周期相近甚至更高的活产率,同时可明显降低卵巢过度刺激风险,提高累积妊娠率,降低异位妊娠率1。据中华医学会生殖医学分会(CSRM)数据上报系统结果显示,2017年全国216家生殖中心完成FET周期数198 918例,活产率为40.19%2,活产率仍不高,如何提高活产率,改善妊娠结局一直是国际辅助生殖领域研究的难点,但目前大部分研究报道的结局指标仍较局限在生化妊娠率或临床妊娠率而不是活产率3, 4。识别影响FET活产结局的相关因素,对指导和优化FET移植策略,提高FET“抱婴率”具有重要意义。因此,本研究的目的是分析影响FET活产结局的相关因素,确定FET活产结局的独立影响因素。

对象和方法
一、研究对象

本研究为横断面研究,回顾性筛选广东省中医院生殖医学中心于2017年1月1日至2020年3月31日期间行FET者。纳入标准:移植1个或2个冷冻胚胎者。排除标准:(1)子宫腺肌病、子宫腺肌瘤、子宫肌瘤、黏膜下肌瘤及未纠正的子宫内膜病变如内膜息肉、重度子宫粘连等;(2)子宫腔畸形如单角子宫、纵隔子宫、双子宫者;(3)复发性流产者;(4)自身免疫性疾病及甲状腺功能异常如甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进症者;(5)夫妻双方染色体检查结果异常者;(6)资料缺失或失访者。本研究共纳入563对夫妻,共获得736个FET周期。本研究方案获得广东省中医院伦理委员会批准(批号:YF2020-215-01),因本研究为回顾性分析,受试者的知情同意被豁免。

二、方法

1.控制性促排卵和卵母细胞回收:本研究纳入病例均为标准长方案或拮抗剂方案。根据对象年龄、病史、体质指数(BMI)和卵巢储备等情况,选择相应的促排卵方案和促性腺激素(Gn)启动剂量。当有2个及以上直径≥18 mm的优势卵泡或3个及以上直径≥17 mm的卵泡时,给予人绒毛膜促性腺激素(HCG,珠海丽珠,中国,2 000 U/支)5 000~10 000 U肌内注射或重组人绒毛膜促性腺激素(艾泽,美国默克雪兰诺公司,250 μg/支)250 μg皮下注射,注射36~38 h后行取卵术。

2.体外受精、胚胎培养及冷冻:(1)授精方式:选择常规体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)方式受精。(2)胚胎分级评定标准:①第3天胚胎根据Peter分级标准5分级,优质卵裂期胚胎的定义为:卵裂球7~9个细胞,均匀,无多核现象,碎片<10%,胞质均匀透亮,无明显粗颗粒或空泡等异常表现;②第5和6天胚胎根据Gardner囊胚评分系统5评分:以囊腔扩张程度分级,囊腔不足胚胎体积的50%为1级;≥50%为2级;囊腔几乎占满整个胚胎为3级;囊腔扩张、透明带变薄为4级;囊胚开始从透明带破口孵出为5级;囊胚完全孵出,脱离透明带为6级。对处于3~6级的囊胚,进一步对其内细胞团(ICM)和滋养外胚层(TE)进行评分,ICM 评分:细胞数量多且分布紧密成团,突起明显为A级;细胞数量较少且分布松散为B级;细胞数量非常少,难以辨别明显的ICM结构为C级;TE评分:较多的细胞形成连接紧密的上皮层为A级;较少的细胞,上皮样结构不连续,连接松散为B级;细胞少且体积大为C级。优质囊胚的定义为3BB级及以上。(3)胚胎冷冻:全胚冷冻或新鲜胚胎移植后剩余可用胚胎均采用玻璃化冷冻技术进行胚胎冷冻。

3. FET周期内膜准备:根据对象的月经情况及病史采用不同的内膜准备方案。(1)自然周期:自月经周期第8~12天起行超声监测卵泡及内膜厚度,当优势卵泡直径≥14 mm,行超声监测及血清黄体生成素监测排卵。(2)激素替代周期(HRT):自月经周期第3天口服戊酸雌二醇片(补佳乐,德国拜耳公司,1 mg /片)4 mg/d,1周后超声监测内膜厚度,酌情维持或添加用量,最大用量≤8 mg/d,至少作用14 d后当子宫内膜厚度≥8 mm,血清E2≥550 pmol/L可予黄体支持转化内膜。(3)降调节激素替代周期(GnRh-a-HRT):在月经周期第2~3天皮下注射醋酸曲普瑞林(德国辉凌制药有限公司,3.75 mg/支)3.75 mg,28 d后启用HRT。(4)促排卵周期:自月经周期第5天开始口服来曲唑(弗隆,诺华制药,2.5 mg/片),2.5~5 mg/d×5 d,第10天超声监测卵泡发育,根据卵泡发育情况决定是否注射尿促性素(hMG,珠海丽珠制药公司,75 U/支),当卵泡直径>18 mm,且血LH>20 U/ml,则肌内注射HCG 8 000~10 000 U,B超监测排卵后第5~6天移植。hMG方案则自月经第3~5天给予hMG 75~150 IU/d肌内注射,至优势卵泡直径≥18 mm,给予注射HCG诱导排卵。

4.内膜转化及FET:HRT及GnRh-a-HRT方案自转化日开始给予黄体酮针剂(浙江仙居仙明制药有限公司,20 mg/支)40 mg/d肌内注射+地屈孕酮片(达芙通,荷兰苏威制药公司,10 mg/片)20 mg/d口服或黄体酮阴道缓释凝胶(美国默克雪兰诺有限公司,250 μg/支)90 mg/d阴道给药+地屈孕酮片20 mg/d口服转化内膜,转化后第3天移植卵裂期胚胎,第5天移植囊胚。自然周期、促排周期对象于排卵后当天开始黄体支持,排卵后3 d移植卵裂期胚胎,5 d移植囊胚。所有研究对象黄体支持药物均持续使用至验孕日,妊娠者持续至妊娠第10周。

5.针刺治疗:(1)针刺穴位及方法:常规消毒后使用一次性银针(0.30×25 mm,表面镀银,200支/盒,苏州针灸用品有限公司生产,版本号:C-160630)针刺气海(RN6)、关元(RN4)、中脘(RN12)、双中极(RN3)、双归来(ST29)、双子宫穴(EX-CA1)、双章门(LR13)、双京门(GB25)、双带脉(GB26)、双足三里(ST36)、双血海(SP10)、双阴陵泉(SP9)、双照海(KI6)、双复溜(KI7)、双三阴交(SP6)和双太溪(KI3),垂直于皮肤或与皮肤呈15°或45°(视具体穴位要求)进针,肌肉单薄处针尖进至筋膜层,肌肉丰厚处针尖进至脂肪下,红外线灯照射腹部及双下肢,留针30 min后拔针。(2)疗程:从月经第2~5天开始行内膜准备开始,每3~7天行1次针刺治疗,直至胚胎移植日前一天,共行3~6次针刺治疗。

6.活产的定义:孕28~37周分娩视为早产,孕37周后分娩视为足月产,活产即为早产或足月产分娩婴儿存活。活产率=活产周期数/移植周期数×100%。

三、统计学分析

应用SPSS 23.0软件对数据进行整理并进行统计学分析。根据临床经验和文献报道,选择了17个可能影响FET活产结局的候选变量。正态分布的连续变量用x¯±s表示,采用独立样本t检验进行组间比较。分类变量用百分比(%)表示,采用χ2检验进行比较。使用单因素和多因素logistic回归模型分析影响FET活产结局的相关因素,结果用OR值(95%CI)表示。双侧检验,检验水准α=0.05。

结果
一、基本情况

纳入对象的男性取精年龄(33±5)岁,女性取卵年龄(31±4)岁,女性移植年龄(32±4)岁,不孕年限(3.5±2.6)年。736个FET周期中共移植1 242个胚胎,其中有333个(45.2%)活产周期,共移植551个胚胎(44.4%),403个(54.8%)非活产周期,共移植691个胚胎(55.6%)。

二、活产组和非活产组对象妊娠结局和妊娠期并发症情况

333个活产周期中早产率为18%(60例),多胎占23.1%(77例),活产组中发生妊娠期并发症者共49例(14.7%),以妊娠期糖尿病为多(9.9%),其中1例因子痫早产,1例双胎妊娠因子痫娩出死胎1个。发生异位妊娠11例(2.7%),其中8例(72.7%)患者不孕因素为输卵管因素。403个非活产周期中有53例(13.2%)自然流产,1例(0.2%)葡萄胎,1例(0.2%)因妊娠中期发现结核感染行人工流产术,2例(0.5%)因胎儿畸形晚期自然流产,1例(0.2%)因胎儿畸形行引产术,余345例(85.6%)胚胎未成功着床(表1)。

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表1

行FET活产组与非活产组对象妊娠结局及并发症情况

表1

行FET活产组与非活产组对象妊娠结局及并发症情况

妊娠结局及并发症例数构成比(%)
活产33345.2

多胎妊娠

7723.1

早产

6018.0

妊娠期糖尿病

339.9

妊娠期高血压疾病

133.9

妊娠期肝内胆汁淤积症

20.6

妊娠期心包积液

10.3

子代出生缺陷

51.5
非活产40354.8

自然流产

5313.2

异位妊娠

112.7

葡萄胎

10.2

胎儿畸形

30.7

注:FET为冻融胚胎移植

三、活产组和非活产组对象基本特征比较

活产组女性移植年龄、女性取卵年龄及男性取精年龄分别为(31±4)、(30±4)和(33±4)岁,均小于非活产组,分别为(32±4)、(32±4)和(34±5)岁,进一步将两组女性移植年龄分为≤35岁和>35岁组,活产组中年龄≤35岁者占85.6%(285例),较非活产组68.7%(277例)高,且活产组原发性不孕的患者占63.1%(210例),较非活产组(49.6%,200例)更高,差异均有统计学意义(均P<0.001)。活产组不孕年限为(3.2±2.2)年,较非活产组(3.6±2.8)年短,差异有统计学意义(P<0.05)。活产组BMI、不孕因素、女性不孕因素、既往移植失败次数与非活产组比较差异无统计学意义(均P>0.05)(表2)。

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表2

行FET活产组和非活产组对象基本特征比较

表2

行FET活产组和非活产组对象基本特征比较

组别活产组(n=333)非活产组(n=403)t2P
女性移植年龄(岁)a31±432±44.84<0.001
女性取卵年龄(岁)a30±432±44.78<0.001
男性取精年龄(岁)a33±434±53.32<0.001
不孕年限(年)a3.2±2.23.6±2.82.050.041
女性移植年龄(岁)b28.68<0.001

≤35

285(85.6)277(68.7)

>35

48(14.4)126(31.3)
BMI(kg/m2b1.380.240

<25

285(85.6)332(82.4)

≥25

48(14.4)71(17.6)
不孕类型b13.34<0.001

原发性不孕

210(63.1)200(49.6)

继发性不孕

123(36.9)203(50.4)
不孕因素b0.650.885

女性

70(21.0)92(22.8)

男性

95(28.5)107(26.6)

双方

162(48.6)198(49.1)

不明原因

6(1.8)6(1.5)
女性不孕因素bc0.062

105(31.5)117(29.0)

输卵管因素

85(25.5)122(30.3)

排卵障碍

74(22.2)69(17.1)

子宫内膜异位症

22(6.6)51(12.7)

合并因素1

34(10.2)30(7.4)

合并因素2

5(1.5)6(1.5)

合并因素3

7(2.1)7(1.7)

合并因素4

1(0.3)1(0.2)
既往移植失败次数b3.630.163

0

157(47.1)170(42.2)

1~2

167(50.2)213(52.9)

≥3

9(2.7)20(5.0)

注:FET为冻融胚胎移植;BMI为体质指数;ax¯±sb例(%);c采用Fisher确切概率法;合并因素1~4分别为输卵管因素+排卵障碍、输卵管因素+子宫内膜异位症、排卵障碍+子宫内膜异位症、输卵管因素+排卵障碍+子宫内膜异位症

四、活产组和非活产组对象胚胎及临床因素比较

活产组移植优胚数、移植胚胎类型及内膜准备方案与非活产组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。活产组移植1个及以上优胚者占为77.5%(258例),移植囊胚者占36.3%(121例),均较非活产组高,分别为65.0%(262例)和21.6%(87例)。活产组激素替代周期者占31.2%(104例),较非活产组(25.3%,102例)高,以上差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组间移植胚胎数、授精方式、有无针刺治疗、转化日及移植日内膜厚度差异均无统计学意义(均P>0.05)(表3)。

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表3

行FET活产组和非活产组对象胚胎因素及临床因素比较[例(%)]

表3

行FET活产组和非活产组对象胚胎因素及临床因素比较[例(%)]

项目

活产组

n=333)

非活产组(n=403)t2P
移植胚胎个数3.050.081

1

115(34.5)115(28.5)

2

218(65.5)288(71.5)
移植优胚个数13.66<0.001

0

75(22.5)141(35.0)

1~2

258(77.5)262(65.0)
移植胚胎类型19.56<0.001

卵裂期胚胎

212(63.7)316(78.4)

囊胚

121(36.3)87(21.6)
授精方式0.120.731

IVF

245(73.6)301(74.7)

ICSI

88(26.4)102(25.3)
内膜准备方案10.700.013

GnRH-a-HRT

161(48.3)196(48.6)

HRT

104(31.2)102(25.3)

促排周期

58(17.4)72(17.9)

自然周期

10(3.0)33(8.2)
针刺治疗3.620.057

26(7.8)18(4.5)

307(92.2)385(95.5)
转化日内膜厚度(mm,x¯±s9.3±1.89.5±2.01.580.115
移植日内膜厚度(mm,x¯±s9.9±2.310.1±2.21.510.133

注:FET为冻融胚胎移植;IVF为体外受精;ICSI为卵胞浆内单精子注射;GnRH-a-HRT为降调节激素替代周期;HRT为激素替代周期

五、FET活产结局的相关因素分析

单因素回归分析提示女性移植年龄、女性取卵年龄、男性取精年龄、不孕年限、不孕类型、移植胚胎数、移植优胚数、移植胚胎类型、针刺治疗、转化日内膜厚度、移植日内膜厚度均与FET活产结局相关。多因素回归分析结果显示,女性移植年龄、不孕类型、移植优胚数以及移植胚胎类型与FET的活产结局相关,OR值(95%CI)分别为0.50(0.27~0.92)、0.62(0.43~0.88)、1.60(1.11~2.31)和2.43(1.46~4.01),均P<0.05。见表4

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表4

行FET对象活产结局相关因素分析

表4

行FET对象活产结局相关因素分析

变量单因素分析多因素分析
OR值(95%CIPOR值(95%CIP
女性移植年龄(岁)0.026

≤35

1.001.00

>35

0.37(0.25~0.53)<0.0010.50(0.27~0.92)
不孕类型0.008

原发性不孕

1.001.00

继发性不孕

0.57(0.42~0.77)<0.0010.62(0.43~0.88)
移植优胚个数0.012

0

1.001.00

1~2

1.85(1.33~2.57)<0.0011.60(1.11~2.31)
移植胚胎类型0.001

卵裂期胚胎

1.001.00

囊胚

2.07(1.49~2.87)<0.0012.43(1.46~4.01)
女性不孕因素

1.001.00

输卵管因素

0.77(0.53~1.13)0.1940.79(0.51~1.24)0.319

排卵障碍

1.19(0.78~1.82)0.4070.96(0.60~1.53)0.871

子宫内膜异位症

0.48(0.27~0.84)0.1100.43(0.22~0.82)0.110

输卵管因素+排卵障碍

1.26(0.72~2.20)0.4120.99(0.53~1.82)0.978

输卵管因素+子宫内膜异位症

0.92(0.27~3.13)0.9051.36(0.36~5.02)0.644

排卵障碍+子宫内膜异位症

1.11(0.37~3.28)0.8441.14(0.35~3.67)0.819

输卵管因素+排卵障碍+子宫内膜异位症

1.11(0.06~18.03)0.9391.11(0.06~19.05)0.941
既往移植失败次数

0

1.001.00

1~2

0.84(0.63~1.14)0.2801.01(0.73~1.41)0.925

≥3

0.48(0.21~1.10)0.0840.84(0.34~2.03)0.700
移植胚胎个数0.053

1

1.001.00

2

0.88(0.81~0.95)0.0031.47(0.99~2.18)
授精方式0.934

IVF

1.001.00

ICSI

1.06(0.76~1.47)0.7310.98(0.66~1.46)
内膜准备方案

GnRH-a-HRT

1.001.00

HRT

1.24(0.88~1.75)0.2180.97(0.66~1.43)0.898

促排周期

0.98(0.65~1.46)0.9250.91(0.59~1.42)0.706

自然周期

0.36(0.17~0.77)0.0800.36(0.16~0.79)0.100
针刺治疗

1.001.00

0.79(0.68~0.92)0.0030.87(0.73~1.03)0.112
女性取卵年龄a0.92(0.92~0.89)<0.0010.97(0.91~1.03)0.344
男性取精年龄a0.95(0.92~0.98)0.0011.00(0.96~1.05)0.713
不孕年限a0.94(0.88~0.99)0.0420.94(0.88~1.00)0.086
转化日内膜厚度a0.97(0.96~0.99)0.0050.95(0.85~1.07)0.450
移植日内膜厚度a0.98(0.96~0.99)0.0050.95(0.87~1.05)0.388

注:FET为冻融胚胎移植;IVF为体外受精;ICSI为卵胞浆内单精子注射;GnRH-a-HRT为降调节激素替代周期;HRT为激素替代周期;a为连续变量

讨论

年龄是影响FET妊娠结局的重要因素之一,女性35岁后生育力加速下降6,但大部分研究的结局指标仅停留在临床妊娠率,活产率的研究较少。本研究以35岁为界点,发现女性移植年龄是FET活产的独立影响因素,这可能与35岁以上女性的卵母细胞质量下降7及早期流产风险升高8相关。

以往认为移植胚胎数量是影响FET妊娠结局的重要因素9。但在本研究中,只有移植优胚数及移植胚胎类型是FET活产的独立影响因素,此结果与最新一项大型的回顾性队列研究10结果相符。孙志丰等11研究报道不同年龄组中单囊胚移植均比双卵裂期胚胎移植具有更高的活产率,而另一项研究指出移植2个优质胚胎组临床妊娠率均高于移植0和1个优质胚胎组(P<0.05)12。这些结果提示,对于冻存胚胎有选择空间的FET患者,可建议先移植单个优质囊胚,避免多胎妊娠带来的风险,以获得最佳的活产结局。

本研究结果显示不孕类型是影响FET活产率的因素,原发性不孕患者的活产率较继发性不孕患者高,其可能与既往流产史及瘢痕子宫患者子宫内膜容受性降低相关13, 14。此外,瘢痕子宫患者为降低妊娠子宫破裂风险,常采用选择性单胚胎移植策略,这可能对活产率造成一定影响。有研究认为,原发性不孕是HRT-FET选择性单囊胚移植的适应证15,但其具体机制尚不清楚。因此,目前不孕类型是否对FET活产妊娠结局尚存在争议16

已有大量研究探讨了内膜厚度与妊娠结局的相关性317, 18,但结果仍存在很大争议,一项荟萃分析19结果表明内膜厚度是否独立影响FET妊娠结局尚不明确。本研究结果认为转化日及移植日子宫内膜厚度并不是FET妊娠结局的独立预测因素。在本研究中,纳入的活产的FET周期转化日内膜厚度≤7 mm有39例,最低4.7 mm,移植日内膜厚度≤7 mm的有38例,最低的仅有4.0 mm,因此,笔者认为,仅使用子宫内膜厚度作为周期取消的指标并不合理,需要将内膜厚度与其他子宫内膜容受性指标以及患者自身状态、胚胎情况等综合预测妊娠结局。

现有研究认为,针灸可能改善子宫内膜容受性,从而改善妊娠结局20,但结果具有异质性21。国外一项随机双盲试验发现新鲜周期和FET患者中针灸组患者与假针灸组患者的活产率无显著差异22。本研究单变量分析提示针刺治疗可能改善FET的妊娠结局,但纳入的针灸例数过少,多因素分析后结果无统计学意义。这也可能与针刺的介入时机及针刺疗程有关。目前国际主流的相关试验主要在移植周期予以针刺治疗,也有研究指出取卵周期同时接受针灸治疗的患者能获得更好的临床妊娠率23,且增加针刺次数可提高IVF患者活产率24。针刺治疗对FET活产结局的影响尚不明确,后期可通过设计大样本的随机对照试验明确针刺对FET妊娠结局的影响。

本研究为回顾性研究,未排除反复胚胎着床失败的患者,该人群可移植胚胎多以卵裂期胚胎为主,同时可能存在潜在的胚胎质量低下、胚胎染色体异常及生育力低下风险。其次,在探讨子宫内膜厚度对活产结局影响时,未对不同内膜准备方案人群进行分层,可能忽视了内膜厚度与特定内膜准备方案的FET周期活产结局之间的潜在关系。最后,考虑到本研究的样本量有限,未来可开展大样本多中心研究以证实结果的可靠性,从而指导和优化临床FET移植策略。

利益冲突
利益冲突

所有作者均声明不存在利益冲突

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